裙带菜多糖的分离纯化、结构表征及其免疫调节作用研究

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1、工程硕士学位论文裙带菜多糖的分离纯化、结构表征及其免疫调节作用研究作者姓名郑桂青工程领域食品工程校内指导教师游丽君副研究员校外指导教师胡明华高级工程师所在学院食品科学与工程学院论文提交日期2018年6月Purification,StructuralCharacterizationandImmunomodulatoryActivityofPolysaccharidesfromUndariapinnatifidaADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：GuiqingZhengSupervisor：Ass

2、ociateProfessorLijunYouSouthChinaUniversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：TS202.1学校代号：10561学号：201521021561华南理工大学硕士学位论文裙带菜多糖的分离纯化、结构表征及其免疫调节作用研究作者姓名：郑桂青指导教师姓名、职称：游丽君副研究员申请学位级别：工程硕士工程领域名称：食品工程论文形式：ꇶ产品研发ꇶ工程设计ꇶ应用研究ꇶ工程/项目管理ꇶ调研报告研究方向：食品营养与健康论文提交日期：2018年6月1日论文答辩日期：2018年5月29日学位授予单位：华南理工大学学位授

3、予日期：年月日答辩委员会成员：主席：莫树平教授级高工委员：崔春教授郑必胜副教授赵振刚副教授游丽君副研究员摘要裙带菜（Undariapinnatifida）也被称为“裙带”或“海芥菜”，是属褐藻门（Phaeophyta）的一种大型经济型食用褐藻，生长于温暖海洋中，在我国主要分布于辽宁、浙江、山东等地。除自然繁殖外，裙带菜在我国北方沿海地区已有规模化人工养殖，其已成为我国第三大栽培海藻。裙带菜中多糖含量丰富，且相关文献表明裙带菜多糖具有良好的生理活性如抗氧化、抗肿瘤、抗病毒等。本文对裙带菜水提多糖的化学组成、结构特性和免疫调节活性进行了研究，得出以下结果：（1）采用

4、水提醇沉法制备裙带菜多糖，提取率为11.00±0.25%，粗多糖UPP的分子量（Mw）为691.05kDa，总糖、糖醛酸、硫酸基和蛋白质含量分别为50.02±1.14%、14.98±0.52%、11.19±0.40%和2.37±0.17%。UPP由葡萄糖、木糖、甘露糖、阿拉伯糖、岩藻糖、半乳糖和鼠李糖构成，其中葡萄糖和木糖的摩尔百分比之和达71.39%。UPP含有62.36%的（1→2）或（1→4）型糖苷键和35.78%的（1→3）位糖苷键。（2）采用DEAESephroseFastFlow阴离子交换柱层析分离获得4个裙带菜多糖组分，分别命名为UPP-1、UPP

5、-2、UPP-3和UPP-4，其中UPP-2和UPP-3的得率最高。各组分的总糖含量介于66.69%-79.93%，其中UPP-2的总糖含量最高。UPP-2、UPP-3和UPP-4含有的较多糖醛酸和硫酸基，为酸性多糖。（3）采用三种不同方法评价裙带菜多糖的体外抗氧化活性，结果表明氧自由基吸收能力（ORAC）由强到弱为：UPP>UPP-4≈UPP-3>UPP-2>UPP-1，ABTS自由基清除能力由强至弱为：UPP>UPP-4>UPP-3≈UPP-2>UPP-1，裙带菜多糖的DPPH自由基清除能力均较弱。纯化后多糖组分的ABTS自由基清除能力为18.67-41.0

6、7μmolTrolox/g，而DPPH自由基清除能力则为8.40-26.54μmolTrolox/g。（4）以NO释放量为主要指标筛选出UPP-2和UPP-3两个免疫活性多糖，分别在基因调控和蛋白表达水平上研究它们的免疫调节活性。RT-QPCR实验表明UPP-2和UPP-3组分均能显著上调RAW264.7细胞的iNOS、TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达。经不同浓度的UPP-2和UPP-3处理后的RAW264.7细胞的TNF-α释放量分别为正常细胞的39-74、31-68倍，IL-6释放量则分别为正常细胞的3-189、2-86倍，且基本与对应mRNA

7、的表达趋势一致。但两个活性多糖组分对IL-1β因子释放的影响较弱。因此，裙带菜多糖组分UPP-2和UPP-3具有显著的免疫增强作用。（5）各多糖纯化组分的单糖组成与糖苷键类型差异较大。UPP-1主要由甘露糖、木I糖和岩藻糖组成，摩尔含量分别为66.73%、12.04%和8.49%；活性组分UPP-2中木糖含量最高（64.55%），其次为葡萄糖（23.81%）。UPP-3也主要由葡萄糖和木糖组成，摩尔含量分别为41.73%和34.59%。UPP-2的糖苷键类型以（1→2）或（1→4）型为主（90.10%）。UPP-3则含有57.54%的（1→2）或（1→4）位糖苷

8、键和41.58%的（1→