丹参多糖的分离纯化与免疫活性的研究

《丹参多糖的分离纯化与免疫活性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、摘要而且在一定浓度范围内存在剂量依赖性。在上述研究的基础上，拟将丹参多糖作为一个免疫增强剂来开发，深入研究其精制工艺，完成部分临床前研究。同时为了进一步开发利用丹参资源，本课题选取丹参为材料，采用现代分离分析技术对丹参多糖组分进行了分离、纯化，并采用现代功能评价方法对小鼠的免疫调节活性进行了初步研究。实验方法及结果1．丹参药材经过水提醇沉、真空干燥即得水溶性粗多糖(SMPc)。采用苯酚硫酸法测定丹参总多糖的含量，考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。结果显示，葡萄糖在0"--'80tag·mLJ范围内线性关系良好，回归方程为y=105．26X．1．2998(

2、R2=0．9971)；蛋白浓度在0"--'0．1mg·mL。之间时，与吸光度呈良好的线性关系，回归方程为y=167．62X．1．4735(R2=0．9991)。结果表明，本方法精密度高、重现性好，可用于丹参总多糖与蛋白质的含量测定。检测发现粗丹参多糖中，多糖含量为40．35％、蛋白质含量为8．96％。2．采用Sevag法、三氯乙酸法对丹参多糖进行除蛋白处理，通过比较不同方法处理后的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的除蛋白工艺条件。正交实验优选Sevag法脱蛋白的最佳条件是：料液比为l：l，氯仿与丁醇的配比为4：l，振摇40min，重复操作次数为5次，此条

3、件下蛋白质去除率为48．65％，多糖保存率为78．6％。三氯乙酸法(4mol·L．1)的最佳浓度为5％(v／v)，此时其蛋白脱除率为52．30％，多糖保存率为87．57％。实验结果表明，三氯乙酸法除蛋白效果优于Sevag法。3．采用大孔树脂法及离子交换层析柱法精制纯化粗多糖，综合比较D．101、AB．8、DB一301及MG．1等4种大孔吸附树脂对粗多糖的分离纯化效果，进一步以DEAE．52离子交换层析法对过AB．8柱制备得到的粗多糖进行分离精制，经4种大孔树脂初步纯化后发现AB．8、DB-301型的树脂脱蛋白效果好，脱蛋白效率高，纯化后多糖含量分别可

4、达78．72％、80．45％。总多糖经DEAE一52树脂进一步分离纯化得到SMPl、SMP2、SMP3三个组分。结果表明，AB．8、DB．301n硕士学位论文型大孔吸附树脂及DEAE．52型树脂可应用于丹参多糖的精制纯化。．4．将60只KM小鼠随机分为空白对照组、模型Cy组(75mg·kg。kCy+香菇多糖片(10mg·k岔1)阳性组，Cy+丹参多糖高剂量组(300mg·k91)、Cy+丹参多糖中剂量组(200mg·k矿1)+Cy和Cy+丹参多糖低剂量组(100mg·kg-1)共6组，在给药10天后，进行碳粒廓清实验，并计算脏器指数、吞噬指数和吞噬系

5、数，观察丹参多糖对CY诱导的免疫低下小鼠相关免疫脏器及网状内皮系统吞噬功能的影响。从实验结果看出：(1)丹参多糖对小鼠脏器系数的影响：①与正常组比较，Cy模型组的胸腺系数、脾脏系数显著降低(PO．05)。表明丹参多糖各剂量组均可对抗Cy引起的脾萎缩，使脾脏系数上调。③丹参多糖中、高剂量组的胸腺系数与模型组比较显著上调(P

6、>0．05)。表明丹参多糖各剂量组均可对抗Cy引起的胸腺萎缩，使胸腺系数上调。(2)丹参多糖对小鼠网状内皮系统吞噬功能影响：①与正常组比较，Cy模型组中廓清指数K及吞噬指数a均显著降低(P<0．05)。表明Cy能显著降低小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，造模成功。②与模型组比较，阳性药组的K、a值均显著上调(PO．05)。表明阳性药香菇多糖可使免疫功能抑制小鼠的吞噬功能上调。③丹参多糖低剂量、中剂量组的K、a值与模型组比较均显著上调(P<0．05)，与正常组比较则无显著差异(P>0．05)。表明丹参多糖低、中剂量

7、组可使免疫抑制小鼠的吞噬功能上调。高剂量的吞噬系数a、吞噬指数K与模型组比较无显著性差异(P>0．05)，作用随着剂量的增加而有一定的减弱。5．通过丹参多糖对免疫抑制小鼠血清中IL-2、IL一10、IFNq的影响研究，111摘要进一步探讨丹参多糖对小鼠的免疫调节作用。取80只健康NIH小鼠随机分为正常对照组、模型Cy组、Cy+阡t性对照组、Cy+粗多糖(SMPe)小剂量、Cy+粗多糖大剂量组(100、300mg·kg‘1)，Cy+丹参纯多糖(SMP)低剂量、Cy+纯多糖中剂量、Cy+纯多糖高剂量组(100、200、300mg·kg。)，共8组，每组1

8、0只。正常对照组，每天灌胃生理盐水1次，0．2ml／109，连续给药10d。除正常对照组外其余各组分别于第1