马齿苋多糖的分离纯化及活性研究

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2、独创性声明lII]1]II]1]I]I]1111ItlY1810081本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进

3、行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：吼蜥加户一P√／马齿苋多糖的分离纯化及活性研究StudyonSeparationandPurificationofPolysaccharidesfromPortulacaoleraceaL．andTheirBiologicalActivities姓2007年6月“1'摘要马齿苋(PortulacaoleraceaL)是我国古老的药食

4、兼用植物。近年来，马齿苋以其丰富的营养、独特的药理作用以及药食兼用的特性，日益受到广泛的关注。研究表明，马齿苋具有调血脂、抗动脉硬化、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等多种药理活性。多糖作为一种重要的生命物质，具有多种生物活性，特别是抗肿瘤、免疫调节作用受到广泛关注。本论文以马齿苋为原料，研究马齿苋多糖的提取、分离纯化及其体内免疫活性、体外抑瘤作用和抗氧化活性，为功能食品和药品的研究开发提供基础，为马齿苋的开发利用提供新途径。本论文的主要研究内容和结果如下：1、研究了马齿苋粗多糖的水提法优化工艺。采用苯酚．硫酸法测定多糖含量，以多糖提取率为考察指标，进行单因素实验，考察固

5、液比、温度、时间、提取次数等因素对提取率的影响。在此基础上，进行正交试验，优化水提法工艺条件。水提法优化工艺条件为温度100℃、时间2h、固液比1：15、提取次数4次，此条件下多糖提取率达94．26％，粗多糖得率为15．50％，多糖含量为22．60％。2、研究了马齿苋多糖的分离纯化工艺，测定了多糖组分的分子量，分析了其单糖组成。(1)比较分析了大孔树脂吸附法、H202法以及活性炭吸附法三种脱色方法对马齿苋水提液的脱色效果，结果表明大孔吸附树脂AB．8的效果较好。(2)对脱色后的马齿苋多糖溶液进行脱蛋白试验研究，比较了三氯乙酸法、sevag法、三氯乙酸．正丁醇法三

6、种方法脱蛋白的效果，结果表明三氯乙酸法效果最好。(3)采用DEAE．52纤维素，对脱色脱蛋白后的马齿苋多糖进行纯化，得到POPSo、POPSl、POPS2、POPS3和POPS4五个多糖组分，纯度分别为84．31％、92．14％、90．45％、88．47％和82．16％，高效液相色谱法(HPLC)测得其分子量分别为1．801x104D、5．583×104D、2．721x105D、6．006x105D和9．443x1050。用气相色谱法测定多糖的单糖组成，结果表明：多糖POPSo中含有单糖葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1．76：1多糖POPSl中含有鼠李糖、葡萄糖和半

7、乳糖，其摩江苏大学硕士学位论文尔比为1．61：1．12：1．4；多糖POPS2中含有阿拉伯糖、木糖、甘露糖和半乳糖，其摩尔比为1．34：1．84：1．52：0．15；多糖POPS3中含有木糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1．62：1．22：1．48；多糖POPS4中含有阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1．22：0．67：0．41。3、研究马齿苋粗多糖(POP)的体内免疫活性。结果表明：马齿苋未脱蛋白粗多糖(POP．1)在剂量100mg／kg下，能明显增强免疫抑Nd,鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p<0．01)；在300mg／kg下，能显著提高免疫抑Nd,鼠的血清

8、溶血素水平(p<0．001)；在100mg／kg、300mg／kg下，能增加免疫抑制小鼠的脾脏指数(P<0．05)。马齿苋脱蛋白粗多糖POP一2在剂量300mg／kg下，能增强免疫抑制小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能(p<0．05)；在300mg／kg下，能显著提高免疫抑制小鼠的血清溶血素水平(p<0．0b1)；在100mg／kg、300mg／kg下，能明显增加免疫抑Nd,鼠的胸腺指数和脾脏指数(P

9、GC、人辟癌肿瘤细胞株A