莪术多糖的分离纯化及生物学活性的研究

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1、莪术多糖的分离纯化及其生物学活性研究研究生：宋扬指导教师：王关林专业：细胞生物学研究方向：生物化学摘要：本研究莪术多糖分离纯化的最佳条件，优化莪术多糖的提取纯化工艺，为进一步探讨莪术多糖的生物活性奠定基础。以莪术为材料，经热水提取、酒精沉淀、脱色、脱蛋白得粗多糖。粗多糖用50％、75％乙醇分级沉淀得两个级分CZl、CZ2，进行DEAE．纤维素柱层析。调节DEAE．纤维素的pH值，比较洗脱曲线的不同。结果表明，CZl经DEAE-纤维素柱层析得到一个组分，CZ2在酸性、中性条件下层析得两个组分，在碱性条件下得一个组分，随pH升高，回收率降低，纯度增高。各纯化得到

2、的多糖组分经纸层析、琼脂糖凝胶电泳鉴定为单一成分。实验证明，pH是影响层析的一个重要因素，因此莪术多糖的最佳纯化pH值为7．0。在莪术多糖的生物话性研究中，利用莪术粗多糖分别对小鼠和雏鸡进行抗肿瘤、抗氧化及提高机体免疫力的研究，结果表明，莪术多糖具有体内抗sl∞实体瘤作用，剂量为500mg／kg*d的抻瘤率高达63．19％，并能提高小鼠的脾指数及血液中SOD、GSH-PX酶活力，降低MDA含量。莪术多糖对·OH和02有明显的清除作用，最高清除率分别是鹤．91％和98．5％。雏鸡血液SOD活性显著增加，与对照组相比最高可提高145％。LPO含量下降，与对照组相

3、比最大可降低加．95％。各组雏鸡体重从用药后第2周开始快速增长，莪术多糖组最大平均周增重为48．759／周。莪术多糖可使血细胞的吞噬率及吞噬指数、法氏囊和脾脏的相对重量明显升高，并能促进法氏囊和脾脏的快速发育。环磷酰胺加莪术多糖组上述指标接近正常对照组，说明莪术多糖能补偿环磷酰胺对雏鸡免疫系统的抑制作用。由此可见，莪术多糖具有很好的清除·OH和02‘、提高SOD和GSH．PX活性、降低MDA和LPO含量的能力，具有～莪术多糖的分离纯化度其生物学活性研究定的抗氧化、抗肿瘤能力，而且能促进雏鸡生产性能，修复组织损伤，提高机体免疫力。关键词：莪术多糖分离纯化生物学

4、活性前言莪术(CurcumazedoariaRose．)为姜科姜黄属多年生草本植物11l，是一种有效的抗癌中药，其主要成分为挥发油、姜黄素和多糖等。莪术具有漫长的药用历史，据唐《药性论》及李时珍的《本草纲目》记载：莪术具有行气破血、消积止痛之功效，被称为血中之气药。在我国的现代医学研究与临床应甩中，莪术在防治恶性肿癌特别是早期富颈癌方箍有较好鹩疗效【’现，莪术多糖也有较好的抗肿瘤、抗衰老I,t,51等生物学活性，但莪术多糖的纯化仍存在一些困难，本实验在开展莪术多糖提取研究的基础上，进一步探讨其分离纯化条件，为工业化生产提供理论依据。目前中草药活性多糖因具有抗

5、肿瘤、抗病毒、抗衰老嘲等生物学活性，并已成为研究领域的热点。据此，为充分开发莪术的药用功能．研究了莪术多糖的生物学活性，探讨了莪术多糖抗氧化、免疫调节等功能的机理。因此，本课题为莪术的综合开发利用，提供了受好的理论基础。第一部分文献综述1．植物活性多糖的研究进展多糖是一类具有广泛生物涪性的生物大分子物质，又称多聚糖，它是维持生命活动正常运转基本物质之一。我国对多糖研究起步较晚，但近年来，随着分子生物学和细胞生物学的发展，具有生物活性的活性多糖的研究日益受到重视。大量研究表明，多糖除有免疫调节、抗肿癌生物学效应外，还有抗衰老、降血糖、降血脂等6莪术多糖的分离纯

6、化及其生物学活性研究作用，且对机体毒副作用小，因此，对多糖研究已成为目前最热门的领域。I．I抗肿瘤活性多糖的抗肿瘤活性己在许多植物中发现。目前公认多糖类抗肿瘤作用主要机理之一是提高机体免疫功能，同时也与其影响细胞生化代谢、抑制肿瘤细胞周期和抑制肿瘤组织中SOD活性有明显关系。熊燕飞等【7l研究了香蕉多糖对S1鲫、EAC、H≈实体瘤模型化小鼠的肿瘤抑制作用机体外诱导Hela和Pc-3m细胞凋亡情况。结果表明：香蕉多糖对S1”EAC、Hz实体瘤显示出明显的抑制效果，并增强机体免疫力：体外对Hela细胞和Pc-3m细胞有明显的诱导凋亡作用，且随时间的延长，凋亡率增

7、加。灵芝孢子总多糖对小鼠Lewis肺癌、小鼠s埘肉瘤有较好的抑制作用，并能明显提高荷Lewis肺癌小鼠NK活性【8】．王淑英等[91采用免疫组化方法研究树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞Rb基因、p16基因和1NF_2表达的影响。实验表明：树舌多糖能增强小鼠HenA瘤细胞Rb基因、p16基因表达活性，共同作用启动细胞周期的负反馈系统，细胞周期的负调节增强，从而阻止细胞无限制从G1期进入S期．抑制细胞增殖失控，起到抗肿瘤作用；TNF-2对多数肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，树舌多糖通过增强小鼠HcpA瘤细胞TNF-2表达活性，使肿瘤细胞病理性坏死或凋亡。枸杞多糖可显著提

8、高荷瘤小鼠胸腺指数、巨噬细腿吞噬功能、脾细胞抗体形成