普洱茶多糖的分离纯化与山麦冬多糖的初步生物学活性实验的研究

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1、摘要本文以普洱茶和山麦冬为研究对象，材料经乙醇脱脂、热水浸提、Sevage法脱蛋白、乙醇沉淀等处理且通过正交设计实验确定了普洱茶综合提取的最佳工艺，得粗多糖。普洱茶粗多糖以DEAE一纤维素离子交换柱层析方法进行纯化得单一多糖成分，然后用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳鉴定纯度；山麦冬粗多糖经微滤除去不溶性物质后依次进行超滤和纳滤，分别得截留液和透过液。将各步截留液减压浓缩、冷冻干燥，得5千／1千(A)、1万／3千(B)、3万／5千(C)、3万(D)分子量分布范围的山麦冬多糖干品，并对所得四个分子量段多糖成分

2、的相关生物学活性进行了研究。本课题具体研究结果如下：以普洱茶为材料、水为提取溶剂，通过正交设计考察了浸提温度、浸提时间、溶剂用量、浸提次数4个因素对其所含茶多酚和茶多糖提取得率的影响，优化了茶多酚和茶多糖综合提取工艺。结果表明，最佳提取工艺条件为浸提温度80℃，浸提时间1h，溶剂用量(固液比)1：10，浸提次数1次。普洱茶粗多糖(皿S)经DEAE-纤维素层析，一共收集到TPSl、TPS2、TPS3、TPS4、TPS5五个组分，其中以TPS3的量最大．对TPS3进行了深入的研究得到主要组分TPS3a

3、．对TPS3a进行了纯度及部分理化性质鉴定，证明TPS3a为单一多糖，且其多糖含量为71．29％。四个分子量段的山麦冬多糖溶液按高低两个剂量组分别作用于四氧嘧啶所致高血糖模型小鼠并测定血糖值，表明各分子量段山麦冬多糖给药组的血糖值都低于同剂量空白对照组，且高剂量组降血糖效果显著。尤其是3万／5千分子量段的山麦冬多糖高剂量给药组与对应空白对照组相比，在各时间点的血糖值均有极显著性差异。四个分子量段的山麦冬多糖溶液分别作用于环磷酰胺致免疫缺陷模型小鼠并测定吞噬系数、半数溶血值HC50、脏器指数，表明山

4、麦冬多糖确实具有免疫增强作用，但是因其分子量分布范围的不同作用效果也有较大差异。其中，3万／5千组、1万／3千组的HC50均有显著增加；3万／5千组、3万组的吞噬指数均有明显增加。关键词：植物多糖；分离纯化；结构鉴定；生物学活性；普洱茶；山麦冬AbstractPuerandRadixLiriopeswereseparatelyextractedbyethanolandhotwatersuccessively．ThewaterextractweredeprotinizedbySevagemethod

5、，precipitatedbyethanol，andthenthecrudepolysaccharideswereobtained．ThecrudepolysaccharideswereisolatedandpurifiedbyDEAE--celluloseion··exchangecolumnchromatography,andthenthehomogeneouspolysaccharidesweregained．Thepurityofhomogeneouspolysaccharidewasid

6、entifiedbypolyacrylamidediscgelelectrophoresis．RadixLiriopesPolysaccharidewereultrafiltratedbyultrafiltrationmembraneofdifferentaperture，andthefourmolecularweightpolysaccharidesof．radixliriopespolysaccharide(A、B、C、D)weregained．Thebiologicalactivitieso

7、f(A、B、C、D)wereelementarilyinvestigated．Andtherelatedresultsasfollows：Theextractiontechniqueofteapolyphenolsandteapolysaccharideswasinvestigatedinthehigh-grateteanamedasPuer．Theprocedurewasthewaterusedasthesolvent，andfourfactorssuchasextractiontemperat

8、ure，ratioofmaterialsandliquid，extractiontimeandnumberofextractionwereselectedatthreelevelstoinvestigate．Theresultsshowedthattheoptimumtechniquewasthatextractiontemperaturewas80℃，extractionwasonehour,theratioofmaterialandliquidWasonetotenandthe