紫芝多糖的提取、分离纯化及其药效活性的初步研究

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1、分类号：单位代码：10092密级：学号：20102014紫芝多糖的提取、分离纯化及其药效活性的初步研究单位：专业：研究生姓名：导师姓名及职称：研究起止日期：提交日期：河北北方学院药学系药理学赵美林王书华教授2012．4．2013．42013．5河北北方学院学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北

2、北方学院，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河：tDIL方学院所有。否则，承担相应的法律责任。导师硌勺予华研究生躲名汲劢f；年j’月岁t7El研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。铷虢嘶圹人八八步月五蚕●f孙年签”生一姓沙目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO6OIOQQIOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯OaO0⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯OQOqO0⋯⋯3英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6研究论文紫芝多糖的提取、分离纯化及其药效活性的初步研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．‘／材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附表⋯⋯gOOIOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36讨论·····⋯···⋯·····⋯·⋯····Oq0160··

4、········⋯···⋯···⋯··39结论与展望⋯⋯⋯⋯OOD⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41参考文献⋯⋯⋯⋯0ODO0OQO6OO⋯OOQO00⋯⋯⋯42综述多糖的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48紫芝的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO61⋯⋯···⋯⋯⋯⋯⋯⋯IOgOag⋯64个人简历⋯QOQOQqOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ql·qOgOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯65中文摘要紫芝多糖的提取、分离纯化及其药效活性的初步研究摘要本研究以紫芝(Ganodermasinense)为原料，分

5、别采用常规水浴浸提法、超声波协助水提法和超临界二氧化碳萃取协同水提法提取紫芝多糖，对三种方法提取得到的紫芝粗多糖进行体外抗氧化及抗肿瘤实验，选取活性较强的紫芝粗多糖进一步分离纯化，对纯化后得到的多糖各组分进行纯度鉴定、分子量测定及进一步的活性研究。1实验内容(1)采用不同方法提取紫芝多糖分别采用水浴浸提、超声波协助水提和超临界C02萃取协助水提法提取紫芝多糖。(2)紫芝多糖提取工艺的优化通过测定紫芝粗多糖对羟基自由基(·OH)和·DPPH自由基的清除作用以及其对人食管癌细胞EC一109的24d"时生长增殖

6、抑制率，考察不同方法提取得到的紫芝粗多糖体外抗氧化及抗肿瘤的能力；确定多糖提取方法，进一步通过单因素试验和正交试验，优化得出紫芝多糖提取的最佳工艺条件。(3)脱色、脱蛋白工艺的研究以紫芝多糖的脱色率、脱蛋白率和多糖保留率3个指标的加权综合评分为依据，对AB．8、D．101、ADS．7和DM．301大孔吸附树脂，717阴离子交换树脂5种树脂进行比较，筛选出效果较好的树脂进行单因素试验及正交试验，得出紫芝多糖脱色、脱蛋白的最佳工艺条件。(4)紫芝多糖分离纯化和分子量的测定应用DEAE一52纤维素离子交换柱层析

7、及SephadexG．150凝胶过滤柱层析对脱色、脱蛋白后的紫芝多糖进一步分离纯化，通过高效凝胶过滤色谱法(}玎，GFC)对精制紫芝多糖组分进行纯度鉴定及相对分子质量的测定。(5)紫芝多糖生物活性的研究通过考察各级分多糖对·OH和·DPPH自由基的清除效果及其对人食管癌细胞EC．109的24小时生长增殖抑制率，研究分离纯化得到的中文摘要三个紫芝多糖(GSP)组分抗氧化及抗肿瘤的能力。2实验结果(1)水浴浸提和超声波协助水提得到的紫芝粗多糖外观一样，均呈棕褐色粉末状；超临界C02萃取协助水提紫芝粗多糖颜色稍

8、浅，呈淡褐色，三者提取率无显著差异。体外抗氧化及抗肿瘤实验表明：水浴浸提法得到的紫芝粗多糖，在其浓度为2．5mg／mL时，对·OH和·DPPH自由基的清除率分别为87．76％和75．14％；浓度为80mg／L时，对人食管癌细胞EC．109生长增殖24h抑制率达35．31％，其抗氧化及抗肿瘤效果均优于其他两种方法，说明水浴浸提法得到的紫芝粗多糖活性较高。(2)本实验采用水浴浸提法提取紫芝多糖，通过单因素实验及正交试验，优化得到紫