多花黄精多糖提取分离、分子量测定及其粗多糖的初步药效研究

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1、学位论文多花黄精多糖提取分离、分子量测定及其粗多糖的初步药效研究Extraction，purificationandmolecularweightdeterminationofpolysaccharidefromPolygonatumcyrtonemaHuaandmadeprimaryanalysisonthepharmacologicaleffectofthecrudepolysaccharide王聪指导教师姓名：直云副敦撞潘瞳鹃巫．究员．申请学位级别：亟±专业名称：生药堂论文提交时间：至Q12生垒旦论文答辩时间：2Q12生三目

2、二。一二年五月中文摘要本课题以多花黄精干燥根茎为原料，对黄精多糖进行了提取、分离及分子量测定研究。进行了多花黄精粗多糖的提取，并对提取的粗多糖进行了初步药效研究。建立测定多糖含量的蒽酮硫酸一紫外分光光度法。以黄精多糖得率为评价指标，对水煎煮、水温浸和微波水溶液提取方法进行筛选，多糖得率分别为：21．6％、6．5％、17．9％，故选择水煎煮法为本研究的提取方法。以黄精多糖得率为评价指标，以提取次数、提取时间和用水量为正交实验的主要因素，每个因素设置三个水平，进行L9(3)4正交实验优选提取工艺参数，并对影响醇沉纯化工艺的固液比和醇沉

3、浓度参数进行优化。实验筛选出最佳工艺条件为：10倍水煎煮3次，每次2h，浓缩至固液比为1：1，醇浓度为75％。本提取纯化工艺所得黄精粗多糖得率约为28％。以蛋白脱除率和多糖保留率为评价指标，采用加权综合评分法比较Sevage法和三氯乙酸法(TCA)法的脱蛋白，结果表明Sevage法经6次萃取，蛋白脱除率可达72．7％，多糖保留率为84，6％。黄精粗多糖经脱蛋白、脱色、透析后，再上DEAE一52纤维素柱，用水、0．1moFL、O．5mol／L的氯化钠洗脱，得到黄精多糖PCPd—I、PCPd．2、PCPd一3，三种组分再分别经Seph

4、adexG一150柱纯化，得到黄精多糖PCPs．1、PCPs．2、PCPs．3，经高效凝胶色谱法检测，均呈单一对称峰，说明样品为均一多糖。黄精多糖PCPs．1、PCPs．2、PCPs一3在紫外光谱260nm及280rim处无明显吸收，说明不含有核酸和蛋白质。在红外光谱显示具有一般多糖类物质的特征吸收峰，在889。1cm"1、891．1cml、891．1cm。处有吸收峰，表明该多糖糖苷键为届构型。针对黄精多糖进行了初步薄层鉴别，结果表明，PCPs．1和PCPs．2分别含有葡萄糖和半乳糖，黄精多糖PCPs．3主要含有半乳糖。采用HPG

5、PC．ELSD法测定黄精多糖分子量，色谱柱为ShodexOHpakSB一804HQ(8．0×300ram)，流动相为0．1mol／L醋酸钱，流速0．8mL／min，柱温30。C。测定结果：黄精多糖PCPs．1，PCPs一2，PCPs一3数均分子量分别为5640、4760、4380道尔顿，重均分子量分别为13000、13900、12200道尔顿，分布系数分别为2．31、2．93、2．80。采用水提醇沉的方法提取黄精粗多糖，并通过溶剂法把多糖粗分为黄精粗多糖l(cPPC．1)和黄精粗多糖2(CPPC一2)两个部分，并对两个部分进行了初

6、步的体外增强免疫力实验。采用MrT法观察了黄精粗多糖CPPC．1和CPPC．2对淋巴细胞转化和增殖作用的影响，同时采用Gfiess法测定了黄精粗多糖CPPC．1和CPPC．2样品诱导RAW264．7细胞生成NO的影响。实验结果表明：黄精粗多糖CPPC．1和CPPC．2对淋巴细胞转化作用没有协同效应；对脾淋巴细胞有一定的增殖作用，黄精粗多糖在CPPC．1为50ug／mL、黄精粗多糖CPPC．2为500ug／mL时其最大促进率分别达20．3％和13．3％：两种粗多糖均不能诱导RAW264．7细胞生成NO。说明黄精粗多糖可能具有增强免疫

7、力的活性。关键词：多花黄精；多糖；分离纯化；高效凝胶色谱；分子量测定ⅡAbstractInthisproject，weextractedandpurifiedthepolysaccharidefi'omdriedPolygonatumcyrtonemaHua,calculateditsmolecularweightandmadeprimaryanalysisonthepharmacologicaleffectofthecrudepolysaccharide．Anthronesulfuric—UVspectrophotometryw

8、aschosenasthestandardmethodforpolysaccharidescontentdetermination．Threeextractionmethods：waterdecoction,waterdipping，microwa