荔枝多糖提取分离纯化与其免疫调节作用地研究

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1、华中农业大学2009届硕士学位论文摘要荔枝属无患子科，是重要的热带亚热带代表性水果，自上世纪九十年代开始在广东、广西、福建、海南等地发展迅速。目前中国是荔枝的主产国，面积与产量均居世界第一，荔枝面积约900万亩，产量130万吨，分别占世界荔枝总面积的84．5％和总产量的70．5％。荔枝汁液丰富，果肉香味浓郁，营养丰富，据中医记载，荔枝果肉有补脾、益肝、养血、悦颜之功效。虽然人们认识到荔枝的滋补功能已有几百甚至上千年的历史，但关于其保健作用的物质基础和作用机制国内外研究及报道甚少，其具体的功能因子和作用机制不清楚

2、。对荔枝多糖(Litchipolysaccharide，简称LCP)的提取、分离纯化及免疫调节活性进行深入系统的研究，可以揭示荔枝滋补健身的物质基础和作用机理，也为荔枝的深加工提供方向和思路，以期为后续研究奠定基础，为LCP保健品的开发提供理论基础和技术指导。本研究探讨LCP的最佳提取工艺参数，并考察所得LCP对正常小鼠免疫功能的影响，对LCP进行分离纯化，并对分离所得的各个组分进行活性评价，逐步筛选鉴定出荔枝活性多糖，在此基础上，对荔枝活性多糖的分子组成和结构进行鉴定。主要研究结果如下：1．LCP提取工艺的优

3、化：通过响应面分析法对LCP的提取工艺条件进行了优化，结果表明：以荔枝干为材料，LCP的最佳提取工艺条件为pH8．2，微波功率559W，提取时间10．8rain，水／料比22．7：1，在此提取条件下，LCP得率可达24．02％，LCP得率是热水提取法的5一-,6倍。2．LCP的免疫调节活性评价：采用正常小鼠动物模型评价LCP的免疫调节活性，结果表明，与正常对照组相比，LCP50mg／(kg·d)剂量组可显著提高NK细胞活性和ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力；100、200mg／(kg·d)剂量组可显著提高小

4、鼠血清溶血素水平；100mg／(kg·d)剂量组可显著提高小鼠胸腺指数。提示50、100mg／(kg·d)剂量组LCP对小鼠的免疫调节具有一定的增强作用。采用体外小鼠脾淋巴细胞培养增殖实验进一步评价LCP的免疫调节活性，结果表明，100ug／mL剂量LCP体外能够显著增强淋巴细胞增殖，200ug／mL剂量LCP协同ConA、LPS能够刺激淋巴细胞增殖，且呈现剂量依赖性。荔枝多糖的提取分离纯化及其免疫调节作用研究3．LCP的分离纯化及各级分的体外免疫调节活性评价：比较Sevage法、酶法和酶．Sevage法三种L

5、CP脱蛋白工艺方法，结果表明，酶．Sevage法脱蛋白效果较好。采用DEAE．52纤维素柱层析、SephadexG．100凝胶柱层析对LCP进行分级纯化，并结合各分离组分在不同浓度条件下对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响比较，分离得到活性组分LCP2a，经纯度鉴定证明其为均一成分。以LPS+LCP及单独LCP对小鼠脾细胞增殖的促进作用作为LCP的免疫活性跟踪指标，比较各LCP级分对小鼠脾淋巴细胞增殖作用的影响，结果表明，LCP经DEAE．52纤维素柱分级后得到的级分LCPl和LCP2之间，各剂量组之间LCP2活性均

6、较LCPl有极显著差异(P

7、iDal。LCP2a主要是由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、核糖组成的杂多糖，高碘酸钠氧化和Smith降解结果表明，其含有1—6位糖苷键，且1-．-6糖苷键占6％，1—3、1—2和1—6糖苷键的比为：68．4：25．5：6．1。本研究创新点：率先建立LCP的的微波协同萃取和分离纯化工艺新方法，其LCP提取率较传统方法显著提高；首次从整体动物水平发现并确证了LCP的免疫调节活性，并明确了其量效关系；以体外小鼠脾淋巴细胞增殖作用为活性跟踪指标，分离出免疫调节活性强的4个LCP组分，并分析了其相对分子

8、量，明确了其中最强活性组分的单糖组成和糖苷键构成。本研究结果对LCP的后续研究有重要价值，可以揭示荔枝滋补健身的物质基础和作用机理，为LCP保健品的开发提供理论基础和技术指导。对于LCP免疫调节的量效及构效关系目前研究尚不完善，需进一步深入研究，探讨其免疫作用的机理。关键词：LCP；提取；分离纯化；免疫调节；结构分析n华中农业大学2009届硕士学位论文Abs仃actLitchi(Sap