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1、中国矫形外科杂志 2003年6月第11卷第11期 OrthopJChin,Vol.11,No.11June2003·777··综 述·神经干细胞的分离培养及体外分化唐少锋综述 汤 逊 林月秋审校中图分类号 R687 文献标识码 A 文章编号 1005-8478(2003)11-0777-04 目前,脊髓损伤的修复和治疗,仍然是一个难以解决的世马、中脑、小脑等处都已分离出神经干细胞,而在正常成年鼠界性难题。虽然在动物实验中已取得了一些令人鼓舞的进的纹状体、皮层和室管膜下层等区域也都证实了神经干细胞展,但至今未
2、找到一种能用于临床的有效方法。神经干细胞的存在。(neuralstemcells,NSCs)的发现为中枢神经系统(centralner2神经干细胞在分离培养过程中表现出很大的种属差异voussystem,CNS)损伤修复及某些疾病的治疗带来了新的希性,类似的培养条件对从不同种属动物同一部位分离的细胞望。因其具有很强的分裂、增殖和自我更新能力,人们把它视具有不同的影响,甚至同一种属的不同种类也存在明显差异。为中枢神经系统移植和替代治疗的理想材料。近年来神经干孕16d(E16)的SD大鼠纹状体干细胞在EGF或EGF和bF
3、GF细胞的研究作为生命科学界的热点受到广泛关注。本文就神存在的情况下仅能扩增21～28d,之后出现危象并死亡,而胚经干细胞的分离、培养及其体外分化作一综述,重点在于人神胎小鼠纹状体干细胞能长期生存8,有人报道其增殖超过40经干细胞的研究。910代。Chow等的实验显示,分别从SD大鼠和Fischer3441 啮齿动物神经干细胞大鼠的胎鼠脊髓分离的细胞在含有EGF和bFGF的培养基中Reynolds等于1992年首次提出成年哺乳动物脑中存在干都能增殖传代,并具有分化为神经细胞和胶质细胞的能力。1细胞的可能性,他们将成年
4、小鼠的纹状体在含有EGF的无但孕14d(E14)的Fischer344大鼠脊髓干细胞仅能维持9代,血清培养液中进行培养,发现部分细胞可分裂增殖形成悬浮之后死亡,而孕14d(E14)的SD大鼠脊髓干细胞可传到20余细胞团,并呈nestin(一种神经上皮干细胞中间丝蛋白)阳性,代,而且晚代细胞继续表现为nestin阳性,并能对不同的外源贴壁培养后生成神经元和星形胶质细胞。同时Reynolds用相性因子反应性分化成多种表型。同的培养方式从孕14d(E14)的胎鼠(小鼠)纹状体分离到类似2 人神经干细胞2的细胞。值得注意的是
5、,同年Richards从成鼠海马也分离出近年来人们对人神经干细胞(humanneuralstemcells,3相似的多能干细胞,表明在CNS的其它区域也可能存在干HNSCs)的分离、传代做了大量的研究工作,报道了许多细胞培细胞。1994年Davis从胚胎大鼠皮质分离到能产生CNS全部养方法,其不同点主要在于培养方式(悬浮还是贴壁)、细胞的三种细胞类型(神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞)的多存活时间、扩增细胞的同质性或异质性、丝裂素的刺激方式和45潜能干细胞。1996年Gritti等将成年小鼠的纹状体在含细胞的分化特
6、性的差异。从文献报道来看,人神经干细胞的有bFGF的无血清培养液中进行培养,也发现单个细胞可增殖分离、培养及长期传代要比啮齿动物困难的多。在培养过程形成球形细胞团,将其移至去除bFGF的培养液中培养,能产中,人们发现其中一个主要的难点在于其长期增殖传代和干生神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,从而证明成年哺乳细胞特性的维持。目前,体外获得人神经干细胞的途径主要类个体脑内存在干细胞。同年Weiss等运用与Reynolds相同6有三种:(1)借助于永生化基因;(2)直接从人神经组织分离培的方法从成年哺乳动物脊髓分离到干细
7、胞。2002年,Lie等7养;(3)从更原始的干细胞分化产生。第一种途径采用遗传修发现并证明了成年大鼠黑质中也存在干细胞。迄今为止,饰法(epigeneticandgeneticmethods),先用永生化基因使细胞在胎鼠的CNS大部分区域,包括皮层、室管膜下层、脊髓、海条件性永生化,其永生化的条件性在于,除了永生化基因的作作者单位:成都军区昆明总医院骨科,云南昆明 650032用外,细胞的长期增殖还需要外源性的、后天的丝裂素的支作者简介:唐少锋(19712),男,安徽砀山县人,主治医师,硕士。研究持。转入永生化基因
8、有两个重要作用,一是提高细胞分裂速方向:脊柱外科与脊髓损伤。电话:(0871)4074662E2mail:tshf200097@hotmail.com度,再者使细胞无限期分裂。第二种途径采用丝裂素刺激增·778·中国矫形外科杂志 2003年6月第11卷第11期 OrthopJChin,Vol.11,No.11June200320殖法(Epige
