新生24hsd乳鼠海马神经干细胞体外培养及诱导分化

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1、《中国图书资料分类法》分类号单位代码：10660R322.81学号：S090017贵阳医学院2012届硕士学位论文新生24hSD乳鼠海马神经干细胞体外培养及诱导分化研究生：李红平导师：康朝胜副教授年级：2009级专业：人体解剖与组织胚胎学2012年5月19日贵阳医学院2012届硕士研究生论文目录摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„

2、„„„„„„13讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„27参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„28英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32略缩词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„34论文原创性说明„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„35附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„361贵阳医学

3、院2012届硕士研究生论文新生24hSD乳鼠海马神经干细胞体外培养及诱导分化专业：人体解剖与组织胚胎学研究生：李红平导师：康朝胜副教授摘要目的：建立新生24h内SD乳鼠海马源性神经干细胞的体外培养方法，探讨含或不含细胞因子的血清培养基诱导海马神经干细胞分化的情况。方法：（1）海马神经干细胞(hNSCs)分离、培养与鉴定；（2）①hNSCs的诱导分化并检测神经细胞特有的抗原标志物检测：分别检测NSE/NF-200,GFAP,Galc的表达。②将hNSCs分为三组，按不同培养液诱导分化，三组均在同一条件下培养，3天

4、后同时收集各组细胞的分化率，并测量各组分化的神经细胞胞体大小，以探索不同培养条件下对神经细胞生长的影响。③电镜下观察hNSCs及诱导分化后的神经细胞。（3）流式检测hNSCs细胞周期。结果：（1）原代及传代的神经球nestin免疫荧光呈阳性表达。（2）①诱导分化后的神经细胞NSE/NF-200、GFAP、Galc免疫荧光均成呈阳性表达。②不同条件下培养3天后hNSCs的分化率，分别为对照组：（5.28士2.09）%；实验组1：（87.01士5.43）%；实验组2：（83.54士6.32）%，实验1组和实验2组均

5、能诱导hNSCs分化，其分化率比较，无统计学意义（P>0.05）。分化的神经细胞在不同培养条件下生长情况无统计学意义(P>0.05)。③电镜下可观察到hNSCs、神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的微细结构。（3）hNSCs细胞周期显示细胞周期完整。结论：1.体外成功分离、培养并鉴定新生24h内SD乳鼠海马神经干细胞。2.含或不含细胞因子（EGF、bFGF）的血清培养基均能诱导hNSCs的分化。3.电镜下观察到hNSCs及诱导后神经细胞的微细结构，说明所培养的细胞为海马神经干细胞。关键词：海马神经干细胞培养分化

6、免疫荧光化学电镜2贵阳医学院2012届硕士研究生论文前言干细胞生物学(Stemcellbiology)是研究干细胞的一门新学科，也是一种新技术和新产业，主要研究干细胞的各种生命现象、生物学特征，以及干细胞的发生、发育、[1]分化等活动规律及应用。大部分学者认为:干细胞是指存在于胚胎直至成体内具有增殖（Proliferation）、自我更新(Self-renewal)能力以及多向分化潜能的原始细胞。干细胞按其来源分类，可分为胚胎干细胞(Embryonicstemcells，ESCs)和成年组织干细胞(Adultp

7、rogenitorcells)；根据其分化潜能的大小可分为3类：①全能干细胞(Totipotentstemcell),如受精卵；②多能干细胞(Pluripotentstemcell)，如神经干细胞、造血干细胞、表皮干细胞等；③单能干细胞(Unipotentstemcell)，也称定向或专能干细胞。无论是哪种干细胞，都具有两个显著的特征：首先是不断增殖，自我更新；其次是在特定微环境下能分化为多种不同类型的细胞。[2]神经干细胞(Neuralstemcells，NSCs)是一种多能干细胞，具有自我增殖、自[3]我更

8、新，多潜能分化的能力，能分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞，能[4]提供大量脑组织细胞的一类细胞总称，被BonnamainV等认为是一种理想的中枢神经移植的供体或载体。在20世纪中叶以前，学者们普遍认为成年哺乳动物中枢神经系统中的神经细胞，在出生后丧失分化能力，逐渐停止神经分化。至20世纪90年代，随着神经科学的蓬勃发展，国内外大量的研究证实，胚胎期和成年哺乳动物的神经组[4]织