嗅鞘细胞体外诱导神经干细胞定向分化的研究

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1、第二军医大学硕士学位论文嗅鞘细胞体外诱导神经干细胞定向分化的研究姓名：穆丽芳申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：何成20080401第二军医大学硕士学位论文．4．NSCsCNSECMoECsCTXB104bFGFPLLCMFiIGFAPSVZSGZOPCsEGFCSPG三、缩略词表neuralstemcellcentralnervoussystemextracellularmatrixolfactoryensheathingcellscortexcellcultureB104neuroblatomacellsbasicfibroblastgro

2、wthfactorPoly··L··LysineconditionedmediumfixedcellCO．culturegliafibrillaryacidicproteinsubventricularzonesubgranularzoneoligodendroeyteprecursorcellsepidermalgrowthfactorchondroitinsulphatepeoteoglycan神经干细胞中枢神经系统细胞外基质嗅鞘细胞大脑皮层混合细胞神经胶质瘤细胞株碱性成纤维生长因子左旋多聚赖氨酸条件培养液固定细胞共培养胶质原纤维酸性蛋白侧脑室室下

3、区海马齿状回亚粒区少突胶质细胞前体细胞表皮细胞生长因子硫酸软骨素蛋白多糖独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：手签字日期：N年．广月如日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文

4、的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：柑导师签名：签字日期：加·3年疹月知日签字日期：炒孑年∥月≯日嗅鞘细胞体外诱导神经干细胞定向分化的研究一、中文摘要神经干细胞(neuralstemcell，NSCs)是指具有分化为神经元和神经胶质细胞的能力，能够自我更新，并提供大量神经细胞的原始细胞群。近年来，有关NSCs的研究已成为神经生物学领域的研究热点，因为它既是研究神经系统发育和神经细胞分化的良好载体，又是治疗中枢神经系统(centralnerv

5、oussystem，CNS)损伤以及退行性疾病最理想的供体细胞来源之一。目前，原位诱导内源性NSCs增殖分化或NSCs移植已被尝试用于治疗帕金森症、亨廷顿病、癫痫、脑缺血和中枢创伤等多种中枢神经系统疾病。研究表明，内源性NSCs激活或外源性NSCs移植可以明显缓解疾病的临床症状，并在一定程度上促进受损功能的恢复。NSCs定向诱导分化为成熟的具有功能的神经元或胶质细胞是使其能应用于临床治疗的关键问题。研究发现，NSCs的分化与其所处微环境密切相关。微环境主要由各种可溶性因子、膜结合因子和细胞外基质(ECM)等众多复杂的成分所构成，这些成分相互影响，相互协

6、调，通过细胞间相互作用的方式参与NSCs的分化发育和功能调节。因此，深入的研究微环境对NSCs分化的调节作用，对临床治疗神经系统疾病具有重要意义。近年来，嗅鞘细胞(olfactoryensheathingcells，OECs)移植被认为是脊髓损伤最有前景的治疗方法之一。动物实验发现，OECs移植可以促进大鼠皮质脊髓束再生，并促进肢体运动功能恢复。临床实验也显示，人OECs种植于脊髓损伤患者的脊髓中，可以部分改善脊髓功能。研究发现，移植的OECs可以通过多种机制促进神经再生。移植的OECs通过分泌多种细胞黏附分子和神经营养因子，使脱髓鞘的轴突重新生成髓鞘

7、，为轴突的再生提供一个良好的微环境；同时形成一个化学和物理屏障来防止再生轴突与胶质瘢痕中的抑制因子接触，进而促进脊髓损伤修复。然而，移植OECs对中枢内源性NSCs增殖和分化是否具有影响目前还知之甚少。本实验旨在研究OECs对NSCs分化的影响及其可能的作用机制，为研究OECs在CNS损伤修复中的生物学机制提供新的线索，同时也为NSCs移植用于神经系统退行性疾病及CNS损伤的临床治疗提供一些新的思路。在研究中，我们首先从成年新生(24小时内)GFP转基因小鼠大脑皮质区分离培养，鉴定NSCs，然后采用细胞共培养模型，比较OECs，大脑皮层混合细胞(CTX

8、)，神经胶质瘤细胞株(B104neuroblatomacells，B104cells)对NSC