热预处理后嗅鞘细胞上清液诱导神经干细胞向神经元定向分化的研究

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1、分类号R74神戮需嚣裟嵩鬻毳究神经千细胞向神经元定问分化嗣饼艽．RegulationanddirectionofNSCs伽2dop乇neuronalfatebyhyperthermiaconditioned研究生姓名指导教师姓名、职称学科专业研究方向湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一四年四月==篡鬻一一溉摘要f删舢舢㈣㈣舢删删目的：近年来大量研究证实嗅鞘细胞(otfactoryensh三五矗：i骑姜在加入370CM组、400CM组和400CM+R组上清液诱导后，通过免疫荧光计数发现，400CM组中分化细胞神经元标志物

2、B微管蛋白(p硕士学位论文一tublinIII，Tuj—1)、微管相关蛋白2(microtubule-associatedprotein2，MAP一2)阳性细胞数目(31．40±1．08％、31．80±1．60％)显著高于370CM组(23．60+1．36％、22．80+1．66％)和400CM+R组(22．60±1．50％、24．00_+2．30％)，370CM与400CM+R两组之间Tuj-I、MAP一2附l生细胞数目无统计学差异。Western—blot也证实，在400CM诱导组中，Tuj—l蛋白表达显著高于370

3、CM组和400CM+R组，而370CM和400CM+R两组之间Tuj—l、MAP一2蛋白表达无显著差异。RT—PCR结果示400EC组HIF一1Q及其下游靶基因EPO、VEGF转录水平较370EC、400EC+R组明显增高；Westernblot结果提示400EC组HIF—lQ蛋白表达含量显著高于370EC、400EC+R组；glisa检测发现400CM组中EPO、VEGF含量显著高于370CM、400CM+R组。结论：OECs经热预处理后，其上清液能更有效的诱导NSCs向神经元定向分化，提高其分化比例。热预处理后HIF

4、—lQ表达上调是促进NSCs向神经元定向分化的重要因素，HIF—lQ下游靶基因EPO、VEGF激活和表达可能是提高Nscs向神经元分化比例的机制之一。关键词：嗅鞘细胞；热预处理；神经干细胞；分化；低氧诱导因子一l热预处理后嗅鞘细胞上清液诱导神经干细胞向神经元定向分化的研究ABSTRACTRegulationanddirectionofNSCstoadoptneuronaIfate0lIN5USIbyhyperthermiaconditionedOEOsserum-freeconditionedmediumObjectiv

5、eRecentstudiesprovidesolidevidencefortheimportancetodelineatethecombinedtransplantationofneuralstemcells(NSCs)andolfactoryensheathingcells(OgCs)fortherepairofcentralnervoussysteminjury．Oneofthelimitationsofthisapproachisthattheproportionofneuronsdifferentiatedfro

6、mNSCsstillremainsatlowlevel．Thus，howtoinduceNSCstodifferentiateintoneuronsmoreefficientlybyOgCsisanattractiveproblem，whichneedsattentiontoberesolved．Inthepresentstudy，weinvestigatedtheeffectsofhyperthermia—conditionedogc—conditionedmedium(OCM)oninductionofNSCsint

7、oneurons．Methods3-day—oldpostnatalmousewerekilled，andtheolfactorybulbs(OBs)weredissected．Theconditionedmedia，named370CM，400CM，and400CM+R(treatedwithHIF一1Qinhibitor)，werecollectedafterOgCshadbeenincubatedat37℃or40oCfor6hr，followedbyincubationat37℃for42hr．Cellviabi

8、litiesofOgCsweremeasuredusinganMTTassay．Then，theseconditionedmediumwerecollectedandusedforNSCIII硕士学位论文induction．TheeffectsofhyperthermicpreconditioningonOECsHI