sRNAsraB调控肠炎型沙门菌的抗蛋清抑菌作用

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1、毕业论文题目：!墨盟垒(曼!垒堕翅蕉盟塞型逆[]菌丝垫堡溘扭董笠旦专业丛生塑鱼生垡垫堂盟级硕士生姓名：整皇遗指导教师(姓名、职称)：室4查夏(塾撞)!鲎銎(塾撞!摘要目的肠炎型沙门菌(SalmonellaentericaserovarEnteritidis，S．Enteritidis)是唯一可在蛋清中生存的沙门菌血清型，其在禽蛋中生存能力对其传播感染起重要作用，使肠炎沙门菌成为引起人类沙门菌病的主要病原。肠炎沙门菌与其他血清型并无太多基因组上的差异，其在蛋清中生存的特性至今尚未弄清可能与其基因表达调控的不

2、同所至。sRNA(smallnoncodingRNA)是近年发现的新的基因表达调控因子，在转录后水平调控基因表达，在生物体的应急、适应性方面起重要作用。本课题研究了沙门菌功能sRNASraB与蛋清及蛋清中各种抑菌因子的关系，以寻找肠炎型沙门菌在蛋清中生存的机理。方法本课题运用Red重组系统(redrecombinationsystem)敲除肠炎沙门菌SE2472的SraB基因，构建sRNASraB敲除株(SE2472ASraB)；并构建可在正常培养条件下低转录sRNASraB的回复质粒pHDB3．SraB

3、，以回复SE2472△SraB表型的缺陷。课题研究了SraB敲除株(SE2472△SraB)和野生型SE2472对抗蛋清抑菌能力的差异，及蛋清中抑菌因子溶菌酶和转铁蛋白对SraB缺陷株的影响，并运用回复质粒验证实验结果。结果实验成功构建了SE2472ASraB及回复质粒pHDB3．SraB。研究发现，敲除株在蛋清存活率为野生型的61．70％，回复株的存活率比敲除株提高25％；在转铁蛋白抑菌实验中，孵育8h和24h，敲除株的存活率分别为野生型存活率的38％和23％，孵育8h后回复株的存活率比敲除株提高15％

4、，24h回复株的存活率有所下降；在溶菌酶抑菌实验中，孵育8h和24h后，敲除株的存活率分别野生型存活率的41％矛I27％，回复株的存活率分别比敲除株提高35％矛N23％。结论肠炎型沙门菌sRNASraB与其在禽蛋中的存活有关，可通过调节细菌抵抗蛋清中溶菌酶抗菌作用，增加肠炎型沙门菌在蛋清中的存活几率。关键词肠炎型沙门菌sRNA毒力控制蛋清IIllllllllIIIllUlllllY2377782THESIS：AnalysistheregulationroleofsRNA(sraB)duringthesur

5、vivalofSalmonellaEnteritidisineggalbumenSPECIALIZATION：BacterialandBiopharmaceuticalPOSTGRADUATE：Hui—yuanJiangMENTOR：Fen．yongLiu(professor)，KeZen(professor)Abstract[Objective]：Salmonellaspp．areimportantfood—bornepathogensofhumanandanimal．s．entericaserovar

6、Enteritidisistheonlyserovarthatroutinelycauseshumaninfectionthroughintactegg，themolecularbasisofitsabilitytosurviveineggispoorlyunderstood．Theimportanceofpost—transcriptionalregulmionbysmallnon．codingRNAs(sRNA)hasrecentlybeenrecognized．ThesRNAsplaydiverse

7、physiologicalrolesinstressresponses，regulationofmetabolism，controlofbacterialenvelopecompositionandbacterialvirulence．Inthisstudy，westudiedregulatoryfunctionofsalmonellasRNAsraBassociatedwithsurvivalabilityofS．entericaserovarEnteritidisineggalbumen．[Metho

8、d]：TostudythecontributionofsraBtothesurvivalabilityofS．Enteritidisineggalbumen，WeconstructthesraBdeletionmutantofSE2472(SE2472AsraB)usingredrecombinationsystem．Thenweconstructcomplementplasmidbyclonedthewild．typeall