肠炎沙门氏菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

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1、肠炎沙门氏菌荧光纳米颗粒试纸条的研制1.广州市疾病预防控制中心广东广州510440；2.深圳市易瑞生物技术有限公司广东深圳518101；3.广州市微生物研究所广东广州510663摘要：［目的］建立肠炎沙门氏菌荧光纳米颗粒免疫层析法。［方法］首先制成肠炎沙门氏菌单抗-荧光纳米颗粒偶联物，以双抗体夹心模式制备沙门氏菌免疫层析试纸条。利用微型手持荧光检测仪读出质控线和检测线上的荧光信号，并利用荧光强度来半定量检测肠炎沙门氏菌。［结果】用所制备的试纸条对5属9种58株中的14株肠炎沙门氏菌的检测结果呈阳性，其它非肠炎沙门氏菌菌株检测结果呈阴性，试纸条灵敏度为2.4&time

2、s;104CFU/mL。用肠炎沙门氏菌免疫层析试纸条和标准法检测58份样品，两种方法的总符合率为86.2%。［结论］肠炎沙门氏菌荧光纳米颗粒检测试纸条为沙门氏菌的快速检测提供了极好的检测方法，其有广阔的应用前景。关键词：偶联物；荧光纳米颗粒；肠炎沙门氏菌；免疫层析试纸条【Abstract】Objective：ToestablisharapidmethodforthedetectionofBacillusEnteritidis.Method：Fluorescentnanoparticleswerecovalentlyconjugatedwithmonoclonalan

3、tibodiesagainstsalmonellaandwereemployedinthedevelopmentoflateralflowstripassay.Thesensitivity，specificityandsemi-quantitativeofthelateralflowstripwereevaluated.Results：Thelateralflowstripassaycorrectlyidentified14enteritidisstrainsof58bacillus,whiletheothernon-enteritidisstrainswerene

4、gative.Thesensitivityofthedipstickwas2.4×104CFU/mL.Thismethodwascomparedwithstandardmethodandtheagreementratesare86.2%.Conclusion：Thislateralflowstripassayissensitive，simple,rapidmethodwithouttheneedofspecialapparatus,soitcanbeusedwildlyinthefuture.【Keywords】Conjugate；Nanoparticl

5、es；BacillusEnteritidis；LateralFlowStrip沙门氏菌(Salmonella)是一类重要的食源性致病菌。目前，沙门氏菌血清型约有2500多种［1］,它可以引发胃肠炎、伤寒、败血症等多种疾病［2-3】。2007年，美国原料花生受到沙门氏菌污染，导致美国44个州发生沙门氏菌疫情，造成637人染病，至少9人死亡。目前针对肠炎沙门氏菌检测的方法主要是两大类：一是传统培养鉴定法，二是快速检测法。传统培养鉴定法具奋结果准确可靠，不需要复杂仪器等特点，但由于其检测周期长、过程繁琐、试剂繁多等缺陷，己远不能满足现代快速检测的需要。基于免疫学、生物医学

6、、分子生物学方法原理的各种快速检测法具有快速优点，但由于其需要昂贵的设备、需带冋专业实验室检测等缺陷，无法满足现场检测的需要。针对以上方法的部分不足，本研究利用磁性荧光纳米颗粒，修饰后连接食源性致病菌特异性抗体，研制食源性致病菌快速检测试纸条。胶体金免疫层析技术具有简便快速、费用低、易于操作等特点［4】，因此在诊断领域得到广泛应用。0前，也冇用胶体金免疫层析试纸条检测沙门氏菌的报道，但是受胶体金的信号强度影响，胶体金免疫层析法的灵敏性不够理想，容易导致假阴性的发生。荧光纳米颗粒内含有大量荧光报告分子，荧光信号强而稳定，不受溶剂的影响，具冇极强的抗光漂白能力。本研究用

7、荧光纳米颗粒取代传统的胶体金颗粒作为标记物，建立了肠炎沙门氏菌的免疫层析检测法。1材料与试剂1.1试剂荧光纳米颗粒由广州市疾病预防控制中心和深圳市易瑞生物技术有限公司联合自制［7】；菌种均为广州市疾病预防控制中心保存标准菌株及环境分离菌株;肠炎沙门氏菌单克隆抗体由深圳市易瑞生物技术冇限公司提供，羊抗鼠IgG购自华美生物公司；硝酸纤维素膜、玻璃纤维素膜购自美国Millipore公司；培养基购自北京陆桥。各试剂均为分析纯。1.2仪器便携式吋间分辨荧光检测仪由广州市疾病预防控制中心和深圳市易瑞生物技术有限公司共同研制。2方法与步骤2.1荧光纳米颗粒的制备2.1.1荧光