肠炎沙门菌随机扩增多态性dna分子分型

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1、肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型【关键词】肠炎沙门菌；随机扩增多态性DNA(RAPD)；分型　　摘要：目的对不同的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型。方法分别提取不同菌株基因组DNA，建立和优化随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系,试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增，筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析。结果筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和OPG-13共4条随机引物具有鉴别作用，每一菌株均可扩增出4～10条DNA片段，大多数片段在100～2000bp之间，共扩增出42条RAPD条带，其中共

2、有条带7条，多态性条带35条，多态性为833%。不同的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在426%～100%之间，在0850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型。结论应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势，对肠炎沙门菌的分子流行病学研究具有较好的应用前景。　　关键词：肠炎沙门菌；随机扩增多态性DNA(RAPD)；分型　　ApplicationofRAPDinmoleculartypingSalmonellaenteritidisisolates　　Ab

3、stract：ObjectiveMoleculartyping12strainsoftheSalmonellaenteritidisisolatedfromdifferentorigins.MethodsThegenomicDNAofdifferentSalmonellaenteritisstrainsamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)systemized.22randomprimersonellaenteritisisolatedfromdifferentsources,andthecleara

4、ndconstantfingerprintsersnamedOPG-03,OPG-06,OPG-07andOPG-13plified4to10DNAfragmentsof100bp～2000bp.42RAPDbandsplified,833%ofthembeingpolymorphic.TheparativeresearchoftheclusteranalysisbasedontheRAPDbandsspectrashoilaritycoefficientbet426%to100%,and12Salmonellaente

5、ritisstrainsinthisexperimentcouldbeclassifiedto5groupsaccordingtotheirgeicrelationship.ConclusionUsingRAPDtosubtypeandcharacterSalmonellaenteritisatmolecularlevelismorerapidandsensitivethanothertypingmethods,onellaenteritis;RAPD;type　　菌株分型对肠炎沙门菌的流行病学调查，以及研究其感染和传播

6、机制具有重要意义。随机扩增多态DNA（RandomAmplifiedPolymorphicDNA,RAPD）具有操作简便、快速、敏感及不需先了解目的基因的核酸序列等优点，目前广泛应用于微生物的分子分型和鉴定、物种亲缘关系的确定及分子流行病学等领域的研究［1-3］。本研究应用RAPD技术对12株不同的肠炎沙门菌进行分子分型，分析指纹图谱对其鉴别的价值并确定不同菌株间亲缘关系，为肠炎沙门菌食源性疾病预防控制和鉴别诊断提供新方法。结果报告如下。　　1材料与方法　　11材料(1)菌株与:12株肠炎沙门菌分别来自病人分离株4株（菌

7、株号为SEarker，dNTPs(大连宝生物工程有限公司)；溶菌酶,蛋白酶K，RNA酶,Sarkosyl(上海申能博彩生物工程公司)；其他试剂均为国产分析纯。(3)随机引物:22条随机引物（编号为OPG-01～OPG-22）由上海申能博彩生物工程公司合成,均为10bp，经筛选用于分型的共有4条，分别为:OPG-03：5′-AATCGGGCTG-3′；OPG-06：5′-CGGCCCCTGC-3′；OPG-07：5′-GGATCCTGAC-3′；OPG-13：5′-CAGCTCCTGT-3′。　　12方法　　121基因组D

8、NA提取挑取单菌落接种100ml乳糖发酵(LB)培养基，37℃震荡培养18h，4℃冷却；6000r/min离心15min，去上清，用预冷三羟甲基氨甲烷(TE)缓冲液洗涤和重悬菌体至3ml；加04ml溶菌酶（10g/L），37℃温浴10min；加04ml30%Sarkosyl溶液在70℃和37℃分别作用20和60min