医学毕业论文肠炎沙门菌随机扩增多态性dna分子分型

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1、肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型姓名：2014年6月25日肠炎沙门菌随机扩增多态性DNA分子分型【关键词】肠炎沙门菌；随机扩增多态性DNA(RAro);分型摘要：目的对不同来源的12株肠炎沙门菌分离株进行分子分型。方法分别提取不同菌株基因组DNA,建立和优化随机扩增多态性DNA(RAPD)反疲体系，试用22条随机引物对不同菌株进行RAPD扩增，筛选清晰稳定的扩增条带做统计分析。结果筛选到OPG-03、OPG-06、OPG-07和0PG-13共4条随机引物具有鉴别作用，每一菌株均可扩增出4〜10条DNA片段，大多数片段在100〜2000bp之间，共扩增出

2、42条RAPD条带，其屮共有条带7条，多态性条带35条，多态性为833%。不冋来源的肠炎沙门菌分离株之间的遗传相似系数在426%〜100%之间，在0850的相似性水平上可将12株肠炎沙门菌分离株分为5个不同的亚型。结论应用RAPD技术在分子水平上对肠炎沙门菌进行鉴别和分型具有简便、快速和辨别能力高的优势，对肠炎沙门菌的分子流行病学研宂具有较好的应用前景。关键词：肠炎沙门菌；随机扩增多态性DNA(RAPD)；分型ApplicationofRAPDinmoleculartypingSalmonellaenteritidisisolatesAbstract:Obj

3、ectiveMoleculartyping12strainsoftheSalmonellaenteritidisisolatedfromdifferentorigins.MethodsThegenomicDNAofdifferentSalmonellaenteritisstrainswereextractedandrandomamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)systemwasdevelopedandoptimized.22randomprimersweretestedtotheanalysison12strainsofSalmone

4、llaenteritisisolatedfromdifferentsources,andtheclearandconstantfingerprintswereselectedforstatisticalanalysis.Results4effectiveprimersnamedOPG-03,OPG-06,OPG-07andOPG-13wereselected,withwhicheachstraincouldbeamplified4to10DNAfragmentsoflOObp〜2000bp.42RAPDbandswereamplified,833%ofthe

5、mbeingpolymorphic.ThecomparativeresearchoftheclusteranalysisbasedontheRAPDbandsspectrashowedthatthesimilaritycoefficientbetweentwodifferentstrainsvariedfrom426%to100o/o，and12Salmonellaenteritisstrainsinthisexperimentcouldbeclassifiedto5groupsaccordingtotheirgeneticrelationship.Conc

6、lusionUsingRAPDtosubtypeandcharacterSalmonellaenteritisatmolecularlevelismorerapidandsensitivethanothertypingmethods,whichindicatebroadfutureofapplication.Keywords：Salmonellaenteritis;RAPD;type菌株分型对肠炎沙门菌的流行病学调查，以及研究其感染和传播机制具有重要意义。随机扩增多态DNA（RandomAmplifiedPolymorphicDNA，RAPD）具有操作简便、

7、快速、敏感及不需先了解目的基因的核酸序列等优点，目前广泛应用于微生物的分子分型和鉴定、物种亲缘关系的确定及分子流行病学等领域的研究［1-3］。木研究应用RAPD技术对12株不同来源的肠炎沙门菌进行分子分型，分析指纹图谱对其鉴别的价值并确定不同菌株间亲缘关系，为肠炎沙门菌食源性疾病预防控制和鉴别诊断提供新方法。结果报告如下。1材料与方法OPG-07:5'-GGATCCTGAC-3'；OPG-13:11材料（1）菌株与来源：12株肠炎沙门菌分别来fi摘人分离株4株（菌株号为SEWX01〜04），生猪肉分离株2株（菌株号为SEWX05,06），熟食样品分离株1株（

8、菌株号为SEYZ08），鸡分离株3株（菌株号为SEY