反义ACC氧化酶基因表达载体的构建及对河套蜜瓜的转化

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1、内蒙古农业大学硕士学位论文反义ACC氧化酶基因表达载体的构建及对河套蜜瓜的转化姓名：王翠艳申请学位级别：硕士专业：蔬菜学指导教师：云兴福2003.5.1摘要本实验以河套蜜瓜果肉基因组DNA为模板，用甜瓜ACC氧化酶基因特异寡核苷酸链为引物进行PCR扩增，得到128bp的扩增产物。将得到的扩增产物克隆到质粒载体pMD—18一T上，筛选反向克隆，然后将其反向构建到植物表达载体pBINYXW的CaMV35S启动子和TMV增强子“Q”的下游，构建成反义表达载体pBINYA。并在对河套蜜瓜授粉受精生物学研究的基础上，通过花粉管通道法转化河套蜜瓜，共获76颗瓜，并进行了硬度和含糖量的分析。关

2、键词：ACC氧化酶基因；反义表达载体：嗄霍≥河套蜜瓜；媛彀，‘了，’＼本实验由盘古集团科技创新基金和内蒙古教育厅基金项目(河套蜜瓜徽卫星DNA的分离及其遗传图谱的构建)资助完成。ConstructionofAntisenceACCOxidaseGeneExpressionVectorandTransformationofCucumismeloL．CVHetaoAbStractDegenerate01igonucleotidestohighlyconservedregionsofCucumismelo1．aminocyclopfopane-1-carboxylicacid(ACC)

3、oxidasegenewereusedtoprimetheamplificationoffragmentof128bpbyploymerasechainreaction(PCR)insamplesofgenomicDNAfromfruitofCucumismeloL．cvHetaoflesh，whichwasclonedintoplasmidvectorpMD一18-T．Theclonofantisenseorientationwereselected，anditwasinserteddownstreamofCaMV35Spromoterandenhancer“Q”ofTMVin

4、totheplantexpressionvectorpBINYXW．antisenceexpressionvectorpBINYAwasconstructed．AtthebasethatpollinationandfertilizationofCucumismeloL．cvHetaowasstudied，usingpollentubepathwaytransformateCucumismeloL．cvHetao，76fruithadbeenobtained，moreover，hardnessandcontentofsugarwereanalysed．Keywords：ACOxid

5、ase，AntisenceExpressionVector，ConstructionCucumismeloLcvHetao；TransformationDjrectedby：ProfYUNXingfuApp}icantforMasterdegree：WANGCuiyan(Olericulture)(AgriculturalInstitute，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Huhhot010018，China)bpBSAODTriSKanAmpIPTGX～galdNTPPCRSDSNPTIIACC英文缩写baSepairsBoyiheSer

6、umAlbumenOpticaldensity(hydroxy—methl)一aninomethaneKanamycinAmpiCillinIsopropylthiogalactoside5-bromo——4——chloro——3——indolyl一0一D-galactOSidedeoxynuckotideTriphosphatesPolymeraseChainReaetionSodiumDodecylSulphateneomycinpbosphotransferaseII1一aminocycIopropane一1一carboxylate碱基对牛血清白蛋白光密度三羟甲基氨基甲烷卡

7、那霉素氨苄青霉素异丙基一B～D-硫代半乳糖苷5一澳一4一氯一3一吲哚一B—D-半乳糖苷脱氧核苷三磷酸聚合酶链式反应十二烷基磺酸钠新霉素磷酸转移酶IIl一氨基环丙烷一卜羧酸内蒙古农业大学硕士学位论文·1引言河套蜜瓜(Cucumisme]oL．CVHetao)俗称华莱士瓜，属葫芦科(Cucurbitaceae)葫芦亚科，香瓜属，甜瓜种，属内蒙古巴盟特产。由于该地区独特的土壤和气候条件，使其瓜香浓郁，风味独特。但河套蜜瓜成熟后，软化速度快，仅能存放一周左右，难以贮运外销，对经济效益的增