粟酒裂殖酵母核糖体蛋白L321和L322功能的初步研究

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1、学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构己经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均己在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：加松日期：汐，；．f。≯6学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文档，可以借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可以采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可以向国家有关机关或机构送

2、交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。(保密论文在解密后遵守此规定)保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：——保密期限为年。学位论文作者签名：苍亏松指导教师签名：日期：加I弓．口S．一日期：摘要Abstract第一章绪论⋯⋯．一酵母背景简介⋯⋯目录IIIIIIlUllUllIIIIIlY23751001酵母的基因组的主要特征⋯⋯⋯⋯⋯2酵母作为模式生物的优势．二核糖体蛋白研究概况⋯⋯⋯⋯1核糖体的研究历史及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯。2核糖体编码基因的表达与调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．1rDNA的转录与调控⋯⋯⋯⋯12⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯】}⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42．2核糖体蛋白基因的表

3、达及调控⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43核糖体蛋白功能研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。三酵母细胞的凝絮以及相关的细胞表面蛋白1凝絮的概念和分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．62无性絮凝的主要特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．1絮凝是由细胞表面的蛋白质造成的⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82．2多种因素引起细胞絮凝⋯⋯⋯⋯2．3絮凝由多种信号转导通路控制⋯⋯⋯⋯⋯．3研究絮凝及相关的细胞壁蛋白的意义⋯。四本论文的研究目的和主要研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。lO⋯．11第二章核糖体蛋白基因敲除引起的细胞絮凝的相关细胞壁蛋白的研究⋯⋯⋯13第一节qRT-PCR分析部分细胞表面蛋白的表达情况1材料

4、与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．1酵母细胞mRNA的提取和cDNA合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．2qRT-PCR引物的设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．141．3细胞壁表面蛋白的转录水平分析⋯．⋯⋯⋯⋯。152结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。162．1qRT-PCR产物特异性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯2．2细胞壁表面蛋白的转录水平分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．163{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯。17第二节过表达部分细胞表面蛋白对细胞絮凝影响的研究⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯171材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．181．2粟酒裂殖酵母SP-Q01基因组的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．181．4细胞壁蛋白基因的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．191．5细胞壁蛋白的酵母表达质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯201．6过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．201．7过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的形态观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯．222结果2．1酵母基因组提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．222．2细胞壁蛋白基因的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．222．3细胞壁蛋白基因的酵母表达质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．232．4过表达细胞壁蛋白基因的酵母菌株的形态观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯．243讨论⋯⋯．第三节敲除部分细胞壁蛋白基因对细胞絮凝影响的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．251．2敲除片段的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．3敲除细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．281．4敲除细胞壁蛋白基因的菌株的形态观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．292结果⋯⋯⋯⋯⋯2．1敲

7、除细胞壁蛋白基因的酵母菌株的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．302．2敲除细胞壁蛋白基因的菌株的形态观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3l3讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3l第三章&Cerevisiae中核糖体蛋白基因的表达与细胞絮凝的关系的研究⋯⋯．33第一节S．Cerevisiae核糖体蛋白基因的敲除及相关研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。331材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。33I．I实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．331．2敲除片段的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯