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《2007粟酒裂殖酵母麦芽糖酶基因的克隆及在大肠杆菌内的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、第33卷第4期曲阜师范大学学报Vol.33No.42007年10月JournalofQufuNormalUniversityOct.2007粟酒裂殖酵母麦芽糖酶基因的克隆及3在大肠杆菌内的表达①②姚淑敏,池振明(①曲阜师范大学生命科学学院,273165,曲阜市;②中国海洋大学生命科学学院,266003,山东省青岛市)摘要:利用PCR的方法,以粟酒裂殖酵母菌的染色体DNA为模板,扩增得到粟酒裂殖酵母的结构基因,其开放阅读框1740bp的序列,可以编码579氨基酸,分子量为67.7kD.利用NCBI对它的蛋白序列进行比对,发现这个蛋白序列与Aspergilluso
2、ryza、Candidaalbicans、Hansenulapolymorpha、Saccharomycescerevisiae、Saccharomycespastorianus的麦芽糖酶相比分别具有40.6%、41.6%、37.9%、34.7%、34.5%的相似性.而与粟酒裂殖酵母的α2葡萄糖苷酶具有99.8%的相似性,由此可以得出克隆得到的结构基因应该是粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶结构基因.将克隆的粟酒裂殖酵母的麦芽糖酶基因克隆到pQE30表达载体中在大肠杆菌中进行诱导表达,然后测定其麦芽糖酶的活力,其酶的比活力是野生菌株的21倍,诱导条件下麦芽糖酶的比活力是非
3、诱导条件下的10倍.关键词:粟酒裂殖酵母;麦芽糖酶;基因克隆;超表达中图分类号:Q36文献标识码:A文章编号:100125337(2007)0420099205[1,2]麦芽糖酶的基因在Saccharomycesstrains,胞核中,这时便阻遏了GAL(半乳糖酶),MAL(麦[3][4]Candidaalbicans,Hansenulapolymorpha菌芽糖酶)和SUC2(蔗糖酶)等基因的转录.在无葡萄株中已经被克隆,并且这些蛋白在N2末端具有较高糖存在或葡萄糖浓度很低的情况下,在具有活性的[5]的相似性.另据报到麦芽糖酶是一种胞外酶,但Snf1复合物(
4、发生了磷酸化)催化下,Mig1发生磷是在粟酒裂殖酵母中麦芽糖酶究竟是怎样的情况,酸化反应,这时磷酸化的Mig1便离开细胞核,受阻还没有报导.遏的有关基因便得到解阻遏,开始转录.另外,日本此外,我们知道麦芽糖酶的合成在Candidaal2香川大学的TakegawaK教授在1998年克隆粟酒[12]bicans,Hansemulapolymorpha,Saccharomyces裂殖酵母中的蔗糖酶基因,并对该基因的序列和cerevisiae和Schizosaccharomycespombe细胞中受大小进行了测定,该基因大小为2Kb,并命名为[6,7]+葡萄糖的阻遏.
5、在Saccharomycescerevisiae和INV,该基因转录和该基因编码的蔗糖酶合成和Candidaalbicans中的麦芽糖酶的合成同样还受麦分泌也受到葡萄糖的阻遏.对另一基因SCR1进行[3]芽糖的诱导,在酿酒酵母中,关于麦芽糖和蔗糖在缺失之后,发现突变株是葡萄糖解阻遏突变株,在生物化学和分子遗传上的应用已经研究的很清楚,高浓度葡萄糖培养基中照样可以正常的生长,并可并且把酿酒酵母作为研究葡萄糖阻遏的模型来进行分泌大量的胞外蔗糖酶,但并没有发现编码胞内和[8211]研究.这种机制表明在酿酒酵母和假丝酵母中胞外蔗糖酶的1.8Kb和1.9Kb的mRNA.
6、说明葡萄糖的阻遏都是通过Mig1蛋白来完成的.西班粟酒裂殖酵母蔗糖酶基因和酒精酵母的还是有些不牙的Gancedo教授在1998年提出了Mig1蛋白质同.到目前为止,在粟酒裂殖酵母菌中还未发现在是如何在分子水平上阻遏有关基因表达和Mig1蛋功能方面类似于酒精酵母菌的Snf1蛋白质,所以在白质如何在高浓度葡萄糖存在情况下活性发生变化粟酒裂殖酵母菌中由葡萄糖引起的胞外酶基因表达的模型.在有葡萄糖存在的情况下,Mig1存在于细和胞外酶合成和分泌阻遏作用和解阻遏作用机制还3收稿日期:2007205231基金项目:国家自然科学基金资助项目(10471075).作者简介:姚
7、淑敏,女,19672,博士,副教授;主要研究方向:微生物生理和遗传.100曲阜师范大学学报(自然科学版)2007年很不清楚.为了研究粟酒裂殖酵母中麦芽糖酶的表2.2培养基和培养条件达以及调节,我们克隆了麦芽糖酶结构基因粟酒裂殖酵母所用培养基为完全合成培养基,(MAL1),并在大肠杆菌内进行了表达.培养基中添加600μg/100mL的肌醇,培养温度为[13]30℃180rpm.所有的细菌都是利用LB培养2材料与方法基,37℃,对于转化的细菌培养基中加入100μg/mL的青霉素.2.1菌株和质粒菌株和质粒见表1.表1菌株和质粒StrainsandplasmidsG
8、enotypesSourcesStra
