her2胞外区基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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1、中图分类号密级HER2胞外区基因的克隆及在大肠杆菌中的表达J⋯●‘-一●·‘no··‘CloningandExpression1nESCherichiac01iofHEI迎ExtracellularDomain计：学位论文：50页表格：12个插图：20幅指导教师：甄宇红教授申请学位级别：硕士学位培养单位：大连医科大学丰雪学科(专业)：药理学完成时间：二O一三年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医

2、科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：丛年』月且日关于学位论文使用授权的说明{HER2胞外区基因的克隆及在大肠杆菌中的表达》系本人在大连医科大学攻读硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本人及指导教师完全了解大连医科大学关于保存、使用学位论文的规定，同意学校保留并向有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版本，允许论文被查阅和借阅，同意学校将本论文加入：1．中国学术期刊(光盘版)电子杂志社——《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库

3、》及CNKI相关数据库。2．中国科学技术信息研究所——《中国学位论文全文数据库》3．国家图书馆本人授权大连医科大学，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文，可以公布论文的全部或部分内容。论文作者签名：彳>粝指导教师签名：塑望鲤签字日期：迎立年』月』日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯IIIIaQOIllIO⋯⋯IOIIIIIIIIIIO00I0001IIOOlOIIOIIOOIlIlOIO00mlI⋯

4、5／＼—1L—jL(一)日lJ舌⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯“⋯⋯⋯·⋯⋯··5(二)材料和设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6(三)实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1O1SKBR3细胞中HER2表达的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO2HER2胞外区cDNA模板的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯113HER2表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯154HER2胞外段在大肠杆菌中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l95HER2胞外段蛋白表达条件的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20(四)实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211SKBR3细胞中HER2

5、表达的检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212HER2胞外区cDNA模板的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233HER2表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯244HER2胞外段蛋白在大肠杆菌中的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯265HER2胞外区蛋白表达条件的优化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28(五)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．30(六)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32(七)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33三、综述⋯⋯⋯oao⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35(二)参考

6、文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46五、攻读学位期间发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49六、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50大连医科大学硕士学位论文皿R2胞外区基因的克隆及在大肠杆菌中的表达研究生姓名：丰雪指导教师：甄宇红教授指导小组：甄宇红教授专业名称：药理学摘要目的：原癌基因HER2(humanepidermalgrowthfactorreceptor2，HER2)是表皮生长因子受体家族中的一员，具有内在的酪氨酸激酶活性，包括信号肽、胞外区、跨膜区和胞内区四个

7、部分。HER2在正常细胞中含量很低，但在乳腺癌、胃癌、卵巢癌等组织细胞中表达量很高，其表达与肿瘤病程的进展及不良预后密切相关。HER2胞外区定位于肿瘤细胞表面，使其成为肿瘤免疫治疗的理想靶点。本研究的目的是构建HER2蛋白重组表达载体，在大肠杆菌中表达HER2胞外区蛋白，为后续HER2抗体及肿瘤蛋白疫苗的制备奠定基础。方法：(1)HER2胞外区模板的克隆：应用RT-PCR技术从人乳腺癌细胞SKBR．3中克隆出HER2的整个胞外区基因。(2)表达载体的构建：以克隆的HER2胞外区为模板，采用PCR分别扩增出HER2胞外区的远膜端