裂殖酵母核糖体l32-2蛋白潜在转录调节调节作用的研究

《裂殖酵母核糖体l32-2蛋白潜在转录调节调节作用的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、9815161、坚持以“求实、创新”的科学精神从事研究工作。2、本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。3、本论文中滁引文外，所有实验、数据和有关材料均是真实的。4、本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其德人或其它祝构已经发表或撰写过的研究成果。5、其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。作者签名：≯易日期：渺f，￡．≯。学位论文使用授权声明本入完全了解南京师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版；有权将学位论文用于非赢利目的

2、的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅；有权将学位论文的内容编入有关数掇库进行检索；有权将学位论文的标题和摘要汇编尚舨。保密的学位论文在解密簌适孺本规定。作者签名刁品目期：a业i：羔!!‘：南京师范丈学博士论文裂殖酵母校糖体L32-2蛋白是一种潜在的转录调节蛋白裂殖酵母核糖体L32．2蛋白潜在转录调节作用的研究‘中文摘要核船作RpL32—2蛋白是～种其白核抛协外功能的蛩门，已发现暖蛋白其有结合RNA和调节自身mR“A的剪接作用，裂殖酵母核糖体L32—2蛋白是我们应用酵母杂交的技术从裂殖酵母eDNA文库中筛选出并利用结构域置换技术鉴

3、定的～种潜在的转隶调节蛋白。1奉研究首先通过提取高=E度的裂孵孵母mRNA制各了较亢赘的裂新群啡的eDNA文库并将其装入酵母双杂交体系中，用克隆出的裂殖酵母钙调素作为诱饵筛选新的钙调素结合蛋白，初步筛选出64个阳性克隆经过回转测序挑出的10个阳性克隆中包括3-磷酸甘油醛脱氢酶(Olyceradehy-3-phosphaled曲ydmgenaseDAPDH)、钙调素激酶HI(CaMK111Melongationfactor2)和磷酸甘油变位酶口hosphoglyeeratemutase)基因，这三个已知的钙调素结合蛋白表达基因。另外还

4、有一个错位的MoeI蛋白和核糖体L32-2蛋白表达基因。通过进一步的对照实验发现RPL32-2蛋自可以不通过与钙调素结台诱导GAL4酵母杂交系统中的报道基因转录表达。对裂殖酵母RPL32．2蛋白序列分析发现该蛋白不具有钙调素结合序列，却与某些锌指蛋白具有一定的同源性，可能是一种具有潜在的转录调节作用的蛋白。2．本研究通过结构域置换术证明裂殖酵母RPL32-2蛋白具有结合DNA和转录激活作用，通过截短该蛋白的方式来确定结构域，结果发现RPL32-2蛋白截去N端或C端后均不能使GAL4酵母杂交体系中的撤道基因激活，说明该蛋白不具有相对独

5、立的DNA和转录激活结构域。3．本研究应用随机PCR技术筛选来确定裂殖酵母RPL32，2蛋自结合DNA的特异性序列，晟终确定其特异性结合序列为GTTGGT。我们进一步用点变异探针来与此序列竞争发现RPL32-2蛋白与这一特异序列结合的核心碱基仅有两个，同时搜索该结合序列在染色体上的位置发现其是多种蛋白基因的供剪接序列。4．本研究应用凝胶滞后技术发现裂殖酵母RPL32-2蛋白与裂殖酵母细胞核中一种AT序列结合蛋白能特异性的与含AT序列的ATwT探针结合且不能被无AT序列的wT探针所竞争，证明裂殖酵母RPL32-2蛋白与这种^T序列结合

6、蛋白具有耜互协同作用。南京师范大学博士论文裂殖酵母核耱体L32．2蛋白是一种潜存的转录调节蛋白综上所述，本实验首次发现并证明裂殖酵母RPL32—2蛋白是一种具有特异性结合DNA和转录激活功能的蛋白，陔蛋自不具有两个桐对独立的DNA结台和转录激活域，其能和一种裂殖酵母核中的A1、序列结合蛋自协同作用，园此我们推测裂殖酵母RPL32-2蛋白可能足一种潜／土的转求调节子。关键词：酵母双杂交，核糖体蛋白L32，裂殖酵母，转录调控。+国家自然科学基金资助项目(30170474)南京』

7、l{i范大学博E论文裂醋酵母攘镑体L32-2蛋白尾一种潜存

8、的转录调节蟹白RPL32—2ofS．pombeisapotentialtranscriptionalregulator‘Abstract1heribosomalproteinL32ISanextra—ribosomalfunctionprotem．ithasbecomeincreasingIy．clearthatappearstointeractwiththreedistinctRNAmoleculestoinfluencethreedifferentelementsofRNAprocessingandfunctionWeusedt

9、heone—hybridscreenmethodrapidlyscreenedapolentialtranscriptionalregulatorfromeDNAlibraryofSpombeanduseddomainswaptect