鱿鱼内脏糖蛋白提取分离及其免疫调节作用的研究

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1、V1405613上分类号UDC‘‘学校代码10566密级广泵诲洋大学硕士学位论文鱿鱼内脏糖蛋白提取分离及其免疫调节作用的研究章建设指导教师姓名雷晓凌教授专业名称水产品加工及贮藏工程研究方向海洋生物活性物质论文提交日期2008年4月鱿鱼内脏糖蛋白提取分离及其免疫调节作用的研究摘要糖蛋白是指由寡糖与多肽链共价连接而成的一类结合蛋白质。研究表明，糖蛋白具有调节免疫、抑制肿瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等作用，在新型特种药物及功能性食品开发方面具有广阔的应用前景。本文检测了鱿鱼内脏的营养成分，优化了鱿鱼内脏中糖蛋白的提取工艺，对鱿鱼内

2、脏糖蛋白进行了分离、纯化，并对其免疫调节活性进行研究，为综合利用鱿鱼内脏资源提供理论依据。通过对鱿鱼内脏营养成分检测结果显示：鱿鱼内脏中主要营养成分是蛋白质和脂肪，分别为57．62％和14．76％，总糖含量较高，为8．76％；氨基酸总量为46．4％，必需氨基酸和氨基酸总量的比值以及必需氨基酸和非必需氨基酸比值分别为37．3％和0．59。在所测的氨基酸中，谷氨酸含量最高，为6．47％，必需氨基酸中亮氨酸含量最高，为3．62％；脂肪酸中EPA和DHA含量较高，分别为14．29％和20．23％；矿物质元素中Ca、Mg、P含量充足，Zn、

3、Fe、Cu等微量元素含有较高，分别为40．5“∥g、lO．3p∥g、1．1“∥g。以糖蛋白得率为指标，分别研究了料液比、温度、提取时间及提取液盐浓度对鱿鱼内脏糖蛋白提取得率的影响，并根据L9(34)正交表综合分析确定最佳提取工艺条件为：料液比为l：6、浸提时间为55min、浸提液盐浓度为3％、浸提温度为80℃。采用硫酸铵分级沉淀和SephadexG．100凝胶柱层析相结合，对鱿鱼内脏糖蛋白进行了分离纯化。用硫酸铵的饱和度分别为20．40％，40．60％，60．80％分三级沉淀糖蛋白，得到GSV-1、GSV-2和GSV-3，再对其进

4、行SephadexG一100凝胶过滤，使分级蛋白中的蛋白质按其分子量的大小先后洗脱，分别收集到鱿鱼内脏糖蛋白GSVI．1、GSV2一l和GSV3—1。并检测了上述样品的部分理化指标。通过SDS．聚丙烯酰胺电泳分析结果表明，鱿鱼内脏糖蛋白的分子量范围在36KD．130KD之间；对纯化后样品进行红外光谱分析说明，这些样品具有典型的糖蛋白的特征吸收峰。本文研究了鱿鱼内脏糖蛋白对KM小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫三方面影响，确定其免疫调节作用。具体实验方法是：小鼠炭廓清实验和免疫器官重量的测定；MTT法检测NK活性和小鼠脾细胞增殖

5、实验；血清溶血素水平和抗体生成细胞数的测定。实验结果如下：(1)鱿鱼内脏糖蛋白粗品(GSV-0)三个剂量均对免疫抑制小鼠和正常小鼠的廓清指数有显著的增强作用；GSV-0在10mg／kg剂量对免疫抑Nd,鼠的胸腺指数有显著的提高作用，GSV-0在30mg／kg、100mg／kg剂量对正常小鼠的胸腺指数有非常显著和显著提高作用。(2)GSV-0、GSV-1和GSVl．1只在较高剂量时显著促进小鼠脾细胞增殖，而GSV-2、GSV-3、GSVl．1、GSV2．1和GSV3．1在低剂量时就能显著促进小鼠脾细胞增殖；GSV不能增强有丝分裂原C

6、onA诱导的脾细胞增殖反应；GSV对NK细胞活性的影响随着的纯度的提高而明显增强，且样品GSVl．1、GSV2．1和GSV3．1在各个剂量上，均对NK细胞都有明显的增强作用。(3)GSV-0在中、高剂量时，显著提高正常小鼠和免疫抑N4,鼠的血清溶血素水平和增加小鼠抗体生成细胞数量，提高小鼠的体液免疫功能。鱿鱼内脏糖蛋白能够显著提高KM小鼠的非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫功能，所以可以认为鱿鱼内脏糖蛋白具有一定的增强免疫功能。关键词：鱿鱼内脏，营养成分，糖蛋白，提取分离，免疫调节IIStudyontheExtrationofGly

7、coproteinfromSquidVisceraanditsFunctionofImmunoregulationAbstractGlycoproteinisaproteinthatiscomposedof01igosaccharidesandpolypeptidechaincombinedthroughthecovalentbond．Researchhasrevealeditsmanybiologicalfunctions，suchasadjustingimmunity,inhibitingtumour,reducingbloo

8、dsugarandpreventingoxidationandcaducity．Asaresult，ithasapromisingprospectindevelopingnewspecialmedicineandfunctionalfood．Int