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1、大鼠骨髓主要细胞成分的分离获取及其免疫调节作用泸州医学院2008年第31卷第2期JournalofLuzhouMedicalCoUegeVo1.31No.22008121大鼠骨髓主要细胞成分的分离获取及其免疫调节作用姜隽,欧阳芳,姜睿(泸州医学院附属医院:外科;内分泌科,四川泸州646000)摘要目的:建立分离获取大鼠骨髓主要细胞成分的方法,了解其免疫调节作用,为骨髓主要细胞成分输注诱导同种异基因移植物免疫耐受奠定基础.方法:采用密度梯度离心法,红细胞裂解法及细胞培养等方法,分离纯化供体大鼠骨髓细胞(donorbo
2、neITIaITowcells,DBMC),骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC),不成熟树突细胞(immaturedendriticcells,imDC),经光镜,电镜形态学,FCM测定imDC表面OX一62,MHC一Ⅱ,CD80和CD86表达,MSC表面CD80一CD86一和CD29表达等细胞表面标志的表型鉴定后,用MTT法检测DBMC,MSC和imDC对供受体混合淋巴细胞反应(Mixedlymphocytesreaction,MLR)的免疫调节作用.结果:分离获取大鼠骨髓主要细胞
3、成分纯度可达85%--00%,活力>95%,均经光镜,电镜形态学,FCM等表型鉴定合格,其中,imDC表面OX-62,MHC一Ⅱ,CD80和CD86表达量分别是90.5%+16.4%,89.5%±6.2%,32.5%±9.2%和27.6%±8.3%;MSC表面CD80-CD86-和CD29表达量分别是86.068%+10.33%和61.77%+6.79%.MLR表明大鼠骨髓主要细胞成分对MLR均有显着抑制作用(P<0.05),DBMC对MLR具有供体特异性免疫调节作用.结论:建立的大鼠DBMC,MSC,
4、imDC分离纯化方法简便易行,所获取的细胞活力,纯度高,可用于实验目的.DBMC,MSC,imDC对受体淋巴细胞增殖反应均有不同程度的免疫调节作用.关键词大鼠;骨髓细胞;骨髓问充质干细胞;不成熟树突细胞中图分类号R392.7文献标识码A文章编号1000-2669(2008)2-0121-05ISoLATINGANDPURⅡYINGMLAINCELLSFRoMRATBoNEMARRoWJiangJun,etalDepartmentofSurgery,theAffiliatedHospitalofLuzhouMedic
5、alColkgeAbstract0bjective:T0isolatedonorratbonemarrowcells(DBMC),mesenchymalstemcells(MSC)andimmaturedendriticcellsmDC1fromtheratbonemarrowananalyzetheirimmunologicregulatoryeffects.Methods:111eratDBMC,MSCandimDCfromratfemoramarrowcellswereseparatedandpurified
6、bygradientcentrifugation.cellculture.etc.ThemorphologicalcharacteroftheculturedMSCandimDCwasobservedunderlightmicroscopeandelectronmicroscope.ExpressionofCDmoleculesweredetectedbyflowcytometry.TheisolatedDBMC.MSCandimDCswereCO—culturedwithallogenicspleencellsi
7、nthemixedlymphocytesreactionrespectively.ThespleencellsproliferationwasmeasuredbvMITI'colorimetry.Results:TheisolatedDBMC,MSCandimDCshadthetypicalmorphologicalcharacterization,theexpressionratesof0X一62.MHCclassⅡmolecule,CD80andCD86inimDCswere90.5%+16.4%,89.5%±
8、6.2%,32.5%±9.2%and27.6%±8_3%respectively.andtheexpressionratesofCD8O—CD86一andCD29inMSCwere86.068%+10.33%and61.77%-I-6.79%.111eisolatedDBMC.MSCandimDCscouldnotablysuppresstheprolife
