粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白的定位及对线粒体蛋白影响的研究.pdf

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3、作者签名；ｉ巧Ｊｙ、滅曰；；期；学位论文使用授权声明ｆ＇Ｉ．研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质文培，可借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可レッ采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可Ｗ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文鞋，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文，密级：保密巧巧为年。－学位论文作者签名；窜指导教师签名：典曰期：曰期；摘要

4、病要线粒体是真核生物中非常重要的细胞器之一它参与ＡＴＰ的合成Ｗ及物质，代谢、细胞调亡等多种生理过程。裂殖酵母ｉＳｃｈｉｚａｓ百ｃｃｈａｒｏｍｃｅｓｏｍｂｅ，Ｓ．ｏｍｂｅｙｐｐ）一作为个简单的真核生物的研究模型，在线粒体的转录和翻译研究中应用广泛，作为线粒体的研究模型，裂殖酵母的优势也越来越被关注。线粒体基因组的转录过程是先形成多顺反子，再进行剪切加工，形成成熟的ＲＮＡ。在多种生物当中，ＰＰＲ蛋白参与到了线粒体基因组的转录和翻译的过程。ＰＰＲ蛋白是指含有两个及Ｗ上串联重复的ＰＰＲ模体的蛋白质，而Ｐ

5、ＰＲ模体则是由３５个氨基酸残基组成的结构域。ＰＰＲ蛋白对单链的ＲＮＡ具有序列特异性识别模式，与ＲＮＡ的转录、编辑、剪切和稳定等过程都密切相关。粟酒裂殖酵母２５ＲＮＡ一的线粒体基因组编码种ｔ、８种ｍＲＮＡ、２种ｒＲＮＡ和个ｍＢ。ｐ一在本文中，我们研究了个ＰＰＲ蛋白在线粒体中发挥的作用。ＰｐｒｌＯ蛋白是一个最近被发现的ＰＰＲ蛋白，通过构建巧的敲除菌，我们发现它在富集培一ＡＷ养基上生长受到了定的影响，而当在富集培养基中加入抗霉素Ａ时，ｆｐＯ菌株的生长受到了剧烈的抑制。这就意味着基因与线粒体的功能密切相一Ｐ关。

6、通过系列的研巧，ｒｌＯ，我们发现，首先ｐ蛋白定位于线粒体中，且位于线粒体内部一一，是个可溶性蛋白。ＰＰＲ蛋白是类与ＲＮＡ结合而发挥作用的蛋一，ＰＰＲ白，它主要参与线粒体基因组的转录和翻译根据蛋白的这特征，我们Ｐ一觉得ｐｒｌＯ蛋白更可能是个线粒体基质蛋白。其次，ＰｐｒｌＯ蛋白功能的缺失影响了线粒体基因组编码的蛋白的合成。通过体内标记线粒体基因组蛋白的实验我ｉ们发现，除了Ｇｏｂ蛋白外，其他线粒体基因编码的蛋白的合成水平出现Ｔ不同程度的降低，尤其是Ｃｏｘｌ、Ｃｏｘ２和Ａｔｐ８，９这几个蛋白。免疫印记分析实验告

7、诉我们，当ｐｐｒＪＯ基因缺失后，线粒体蛋白ＣｏｘＫＣｏｘ２、Ｃｏｘ３、Ｃｏｂｌ的水平剧烈下降。几乎检测不到。既然巧？ＷＯ基因敲除之后影响了线粒体基因组编码的蛋ｌ白的合成，同时也使得蛋白Ｃｏｂ变得极不稳定。那么对于核基因组编码的参与构成复合体ＩＶ的蛋白Ｃｏｘ４，是不是也受到了影响呢？我们表达了Ｃｏｘ４蛋白，并送蛋白样品到公司制备了相应的抗体。通过免疫印记分析实验，我们发现Ｃｏｘ４一蛋白的水平也出现了定的降低。因此，我们认为ＰｐｒｌＯ蛋白与线粒体功能的发挥密切相关。它通过影响线粒体编码的蛋白的合成从而使得呼吸传

8、递链过程中的。复合体瓦解，导致了线粒体功能的缺失关键词！粟酒裂殖酵母，线粒体，ＰｐｒｌＯ，抗霉素Ａ，呼吸传递链１ＡｂｓｔｒａｃｔＡｂｓｔ巧ｃｔＭｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｉｓｏｎｅｏｆ化