寒凉药对热证大鼠肝线粒体蛋白质组的影响-论文.pdf

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1、第38卷第23期2013年12月、黼中China圈JournI中ofCh。n药esea杂teria志edicaVoD1．ec3e8m，bIsesru，e20213寒凉药对热证大鼠肝线粒体蛋白质组的影响李毅，卢德赵，唐利华，沃兴德，杨贞(浙江中医药大学生命科学学院，浙江杭州310053)【摘要]自20世纪60年代起，现代科学开始对热证的本质进行研究，但有关热证的病理机制和寒凉药物的作用机制等尚未深入系统研究。该研究以具有代表性的热性中药喂饲动物造成热证模型，后用寒凉药进行实验性治疗，拟采用双向电泳及质谱分析技术对热证模型大鼠及寒凉药治

2、疗后的大鼠肝线粒体蛋白组进行比较，从中发现热证及寒凉药治疗后的特异性相关蛋白质。[关键词]寒凉药；热证；线粒体；蛋白质组寒热是用以概括机体阴阳盛衰的两类证候。祖至1g·mL一。双向电泳相关试剂均购自Bio—Rad国医学认为“阳胜则外热”、“阴虚则内热”，在临床公司，酶解试剂均购自Sigma公司。上热证主要表现为：恶热喜冷，烦躁不安，口眼干燥，1．2动物分组及造模清洁级SD雄性大鼠18面红目赤，咳痰黄稠，舌红脉数等，综合起来以基础只，体重180～220g，购自浙江大学动物实验中心，代谢率偏高，机体能量过剩为特征。热证的形成机随机分为正

3、常对照组、热证模型组和药物治疗组。理有很多，中医古籍《黄帝内经》等对其病因均有介参照徐志伟等的实验方法，正常对照组动物正常绍，自20世纪60年代起，现代科学开始对热证的本饮食，每鼠每日灌喂生理盐水4mL，共4周；热证模质进行研究，然而目前有关热证的病理机制和寒凉型组每鼠每日灌以温热药4mL(约含4g生药)，造药物的作用机制等，尚未深入系统研究¨J。模2周后继续每鼠每日4mL生理盐水灌胃2周；药肝脏是人体重要的代谢器官，肝细胞中的线粒物治疗组为造模2周后每鼠每日继续灌以寒凉药4体则是重要的细胞器，是细胞呼吸链和氧化磷酸化mL(约含4g

4、生药)2周。的中心，在能量代谢中发挥着重要的作用。本研究1．3常规生理指标检测4周后开始分别测定3以具有代表性的热性中药喂饲动物造成热证模型，组大鼠体重增长值，24h尿量，饮水量和饮食量，并后用寒凉药进行实验性治疗，拟采用双向电泳及质测定肛温。谱分析技术对热证模型大鼠及寒凉药治疗后的大鼠1．4血清激素含量测定4周后采用眼眶后静脉肝线粒体蛋白组进行比较，从中发现热证及寒凉药丛取血法。每组每只大鼠采血3～4mL，分离出血治疗后的特异性相关蛋白质，在线粒体蛋白质组水清，运用双抗体夹心化学发光两步法检测血清113，平阐述中医热证能量代谢障碍

5、的内在物质基础及寒T4含量；应用固相竞争化学发光酶免疫分析法测定凉药的作用机制，进而指导中医的临床诊断与治疗。睾酮含量。1材料与方法1．5大鼠线粒体蛋白质提取及差异蛋白质分析41．1药材与试剂所有中药均采购于杭州方回春周后处死大鼠，取肝脏匀浆，按文献方法提取肝脏线堂药店。温热药以附子、干姜、肉桂按1：1：1比例，粒体蛋白质，进行双向电泳，每组重复3次。经常规煎2次，合并浓缩至1g·mL～；寒凉药以黄UMAXImageScanner凝胶扫描仪扫描图谱，运用Im—芩、黄连、黄柏按1：1：1比例，常规煎2次，合并浓缩ageMaster软件

6、分别进行两两比较。分别取2组问相互匹配且具有明显表达差异(Variation>2．0，P<[收稿日期]2013-06-180．05)的蛋白质进行酶解及质谱鉴定。[基金项目]浙江省中医药管理局重点项目(2006Z002)；浙江省中2结果医药管理局项目(2007CB139)[通信作者]杨贞，Tel：(0571)86613626，E-mail：msyangzhen@2．1常规生理指标观察热证大鼠体消瘦，烦躁、163．corn多动，口渴喜饮，厌食，皮毛干燥无光泽，竖毛易掉·4144·第38卷第23期中圈中药杂右、VoD1．38，Issue2

7、32013年12月ecember，2013落，灌药时挣扎较明显，尿液少且颜色明显红赤，大明显改善，见表1。便干硬。经寒凉药治疗后大鼠各项症状、体征均有与对照组大鼠比较，模型组大鼠饮食及体重表1各组大鼠代谢指标的测定(面±s，n=6)Table1Determinationresultsofmetabolicindexesinrats(面±s，n=6)注：与对照组比较’P<0．05，P<0．01；与模型组比较P

8、水量显著下降，其余指标未明显改变。■2．2激素水平变化甲状腺激素在体内的主要作用是促进组织氧化及产热，使机体能量代谢维持一A．对照组；B．模型组；C．寒药治疗组。定水平，从而稳定体温j。中医认为：阳盛则热，与图1大鼠肝线粒体蛋白质的双