解耦联蛋白2对颗粒细胞抗氧化能力及线粒体功能的影响研究

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1、论文题目：鲤揭毯蛋自2过题粒细胞揎氢丝篚力丞线粒佳功能的髭喧研究答辩委员会主席：挞鲑丞塾援(虫出太堂附属箍三医瞳2答辩委员会成员：韭松墓塾援(逝塑太堂附属盈匿迤去医院2塞雪速塾援!显趔医堂院附属箜三医院2目录一、缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1二、摘要1．中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22．英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3三、论文正文1．前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83．结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯174．分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯236．参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34六、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35七、论文独创性声明和使用授权声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42瓣温州医学院硕士学位论文英文缩写及中英文对照英文缩写英文全称中文译文UCP2ROSGSHGSSGSODGnRHCOHPCOSCOCHTFICSIPBSHRPATPSDS．PAGETBSAPSTEMEDRT．PCR(Real．TimePCR)SPSSDMEM／F12DCFH—

3、DAuncouplingprotein2reactiveoxygenspeciesglutathioneoxidizedglutathionesuperoxidedismutasegonadotropinreleasinghormonecontrolledovarianhyperstimulationpolycysticovarysyndromecumulusenclosedoocytesHumantubalfluidintracytoplasmicsperminjectionphosphatebufferedshinehorseradishperoxidaseadenosin

4、etriphosphatesodiumdodecylsulfate-polyacrylamidegelelectropheresistrisbufferedsalineammoniumpersulfatetetramethylethylenediaminereal—timefluorescencequantitativepolymerasechainreactionstatisticalpackageforsocialscienceDulbecco’SModifiedEagleMedia：NutrientMixtureF．12dichlorodihydrofluorescein

5、—diacetate解耦联蛋白2活性氧还原型谷胱甘肽氧化型谷胱甘肽超氧化物歧化酶促性腺激素释放激素控制性超排卵多囊卵巢综合症卵丘卵母细胞人输卵管培养液卵胞浆内单精子注射技术磷酸盐缓冲液辣根过氧化物酶三磷酸腺苷十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳三羟甲基氨基甲烷过硫酸铵四甲基乙二胺实时荧光定量多聚酶链式反应社会科学统计软件包改良Eagle培养基二氯荧光素姆温州医学院硕士学位论文解耦联蛋白2对颗粒细胞抗氧化能力及线粒体功能的影响研究中文摘要目的：卵泡颗粒细胞所提供的营养和信号是决定卵子能否正常生长和成熟的关键。人类卵泡颗粒细胞上存在着线粒体解耦联蛋白2(UCP2)的表达。但UCP2在

6、颗粒细胞中的具体作用尚末被充分阐释。UCP2在颗粒细胞生长、增殖过程中到底发挥了何种作用?是否参与了卵母细胞生存环境的调节?本研究以原代培养的人类卵巢颗粒细胞为研究对象，通过引入UCP2特异性抑制剂京尼平，分析UCP2抑制对颗粒细胞氧化水平和抗氧化能力、线粒体膜电位强度、及培养液中甾体激素水平的影响，探讨UCP2在颗粒细胞中的作用，以及对和卵母细胞成熟、卵子发育的可能影响，从而为改善当前辅助生殖技术周期妊娠结局提供新思路。方法：以2011年lO月-2012年10月在本生殖中心行常规IVF或ICSI的输卵管因素不孕者卵丘卵母的颗粒细胞进行原代培养，加入UCP2蛋白抑制剂京尼平，用

7、实时荧光定量PCR(FQ．PCR)并13Westernblot检测和验证颗粒细胞UCP2mRNA和UCP2蛋白水平，并通过分析颗粒细胞的ROS水平、谷胱甘肽水平，线粒体膜电位水平，超氧化物歧化酶水平，以及培养液中E2、P激素水平的变化，以分析UCP2功能抑制对颗粒细胞的影响。结果：1、随着京尼平浓度增加，颗粒细胞活力呈下降趋势，在100pM时明显低于对照组(尸<0．05)。2、京尼平呈浓度依赖性抑制UCP2蛋白表达，在2013M和50pM时明显低于对照组(P