人类ttc3蛋白功能的初步研究

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1、东南大学硕士学位论文人类TTC3蛋白功能的初步研究姓名：周洵申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：窦非20080901人类TTC3蛋白功能的初步研究研究生：周洵导师：窦非教授东南大学“发育与疾病相关基因”教育部重点实验室，南京210009中文摘要位于唐氏综合征关键区域l的TTC3基因编码的TTC3蛋白(Tetratricopeptiderepeatdomain3)全长2025aa，在结构上其N端含有4个TPR结构域，C端含有1个RINGfinger结构域。关于TTC3的研究一直少有涉及。为了探讨该蛋白的正常生理功能以及其在唐氏综合征的发生、发展中可能的作用

2、机制，首先构建了一个含有TTC3全长eDNA的表达质粒pCMV二Myc．TTC3，并在哺乳动物细胞里检测了该蛋白的表达。其次以包含了TPR结构域的该蛋白N端截短片段TTC3(1-650)作为诱饵蛋白，利用酵母双杂交系统对人脑eDNA文库进行筛选，总共筛出20个阳性克隆。经过测序鉴定和迸一步分析，找到三个可能与TTC3发生相互作用的蛋白：Homosapiensproteasomesubunit,betatype6(PSMB6)、Homosapienspolymerase(DNAdirected)，gamma(POLG)以及Homosapiensheatshockp

3、rotein90kDa,alpha(HSP90ct)。根据以上结果推测，TTC3可能参与了泛素．蛋白酶体系统，是一种具有泛素连接酶E3活性的共分子伴侣。在唐氏综合征中，过表达的TTC3可能是通过影响中枢神经系统某些蛋白的降解来引起相关表型。同时，以包含TPR和RINGfinger结构域的氨基酸序列作为抗原，制备了两个针对TTC3的兔多克隆抗体，为后续实验的开展奠定了基础。关键词：唐氏综合征：TTC3；TPR结构域；酵母双杂交：多克隆抗体PreliminarystudyonthefunctionofhumanproteinTTC3Graduatestudent：Z

4、HOUXunSupervisor：ProfessorDOUFeiKeyLaboratoryofDevelopmentalgenesandHummandisease，MinistryofEducation,SoutheastUniversity,Nanjing210009AbstractHumanproteinTTC3，whichcontainsfourTPRdomainsinN-terminusandoneRINGfingerdomaininC-terminus，isaproteinoftLqknownfunctioninvolvedinDownsyndrome

5、．TounderstaIldⅡlephysiologicfunctionofTTC3anditsroleinDownsyndrome，arecombinantplasmidpCMV-Myc．TTC3哪constrLI曲edfirstandtransfectedintoCOS7fortheexpressiontestingofTTC3．Then,yeasttwo-hybridscreeningwasperformedwithahumanbraineDNAlibraryandabaitplasmidencoding缸1巧50ofTTC3．Threecandidate

6、proteinswereidentified：Homosapiensproteasomesubunit,betatype6(PSMB6)．Homosapienspolymerase(DNAdirected)，gamma(POLG)andHomosapiensheatshockprotein90kD巩alpha(HSP90a)·TheresultsuggeststhatTTC3probablyhasdualfunctionasbothco．chaperone觚dE3ubiquitinligase·TheoverexpresionofTTC3inDownsyndro

7、memaycauseabnormalpheIlo锣pesbydisorderdregulationofproteindegradationintheubiquitin-proteasomesystem．Atthes锄etime．twodi髓rentpolyclonalantibodiesagainstTPRdomainandRINGf'mgerdomainrespectivelywerepreparedforfurtherresearchKeywords：Downsyndrome；TTC3；TPRdomainyeasttwo-hybrid：polyclonala

8、ntibodyn东南大学