小鼠诱导多能干细胞与phbhhx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究

《小鼠诱导多能干细胞与phbhhx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、单位代码：10025分类号：R654学号：122013000589密级：非密CapitalMedicalUniversity硕士学位论文小鼠诱导多能干细胞与PHBHHx膜体外共培养并制作心肌补片的实验研究StudyonPHBHHxCo-culturedwithMouseInducedPluripotentStemCellsforUseasMyocardialPatchesinVitro研究生：许士俊学科专业：外科学(胸心外)指导教师：穆军升导师单位：首都医科大学附属北京安贞医院完成日期：二〇一五

2、年十二月首都医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文

3、被查阅和借阅。本人授权首都医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“√”）：1、保密□，在年解密后适用本授权书。2、不保密□。作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日目录中文摘要……………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………3前言…………………………………………………………………5正文…………………………………………………

4、………………61.材料与方法…………………………………………………62.结果…………………………………………………………103.讨论…………………………………………………………164.结论…………………………………………………………18参考文献……………………………………………………………19文献综述……………………………………………………………22附录…………………………………………………………………42攻读学位期间发表论文情况………………………………………44致谢……………………………………

5、……………………………46个人简历……………………………………………………………47首都医科大学硕士学位论文摘要目的：通过3-羟基丁酸与3-羟基己酸的共聚酯膜（PHBHHx膜）与小鼠诱导多能干细胞（miPSCs）体外共培养，研究这种新型的高分子材料对miPSCs粘附、存活及分化的影响；进而找到一种适合小鼠诱导多能干细胞生长、增殖及分化的高分子生物材料，制作心肌补片，作为治疗心肌梗死等疾病的新方法。方法：复苏miPSCs，传代培养后，将miPSCs与PHBHHx二维膜和PHBHHx三维膜（膜上有孔

6、径，模仿三维空间）共培养，72小时后固定并进行扫描电镜观察细胞形态，CCK-8法检测细胞活力，DAPI荧光染色观察细胞在PHBHHx膜上细胞粘附情况。用含和不含维生素C的分化培养基对其进行诱导分化，21天后通过免疫荧光、流式细胞术观察细胞分化情况，测定心肌细胞特异性蛋白cTnT和a-actinin的含量来分析PHBHHx膜对miPSCs向心肌细胞分化的影响。结果：miPSCs可以在PHBHHx膜上良好的粘附和存活，细胞在PHBHHx膜上可以保持正常形态。培养72小时后CCK-8法检测细胞活力显示

7、，PHBHHx三维膜培养在450nm处的吸光度值为0.836±0.038>PHBHHx二维膜培养吸光度值0.617±0.018>传统的细胞培养皿培养0.312±0.003（p<0.05）。维生素C作为一种良好的体外诱导剂，可以极大地促进miPSCs向心肌细胞分化，诱导分化21天后免疫荧光测定心肌细胞特异性蛋白cTnT表达阳性；流式细胞术测定cTnT和a-actinin均表达阳性，其中cTnT的表达量：加维生素C诱导剂组cTnT为（47.54%±1.46%）>未加任何诱导剂组（7.02%±0.95

8、%）（p<0.05）。在miPSCs和PHBHHx膜共培养向心肌细胞分化过程中，在添加维生素C诱导剂的情况下，PHBHHx三维膜细胞培养分化cTnT的表达量为（60.32%±1.76%）>PHBHHx二维膜细胞培养分化cTnT的表达量（53.31%±1.41%）>传统的细胞培养皿培养（47.54%±1.46%）(p<0.05)。a-actinin的表达量：加维生素C诱导剂组a-actinin为（48.38%±1.32%）>未加任何诱导剂组（7.01%±0.87%）（p<0.05）。在miPSCs