抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞

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1、抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞李捷，张宜明，刘颖，夏晖，于长海（解放军总医院第一附属医院心胸外科，北京100037）提要：目的　探讨采用抗坏血酸诱导体外培养小鼠胚胎干细胞（mouseembryonicstemcell，ES）分化为心肌细胞的可行性。方法未分化ES细胞在滋养层上长至汇合，胰酶消化成单个细胞经旋转生物反应器制备拟胚体（embryoidbodies，EB），EB贴壁后用抗坏血酸诱导分化为心肌细胞。通过光镜观察跳动的心肌细胞，采用免疫组织化学、激光共聚焦和RT-PCR的方法鉴定心肌细胞。结果抗坏血酸能有效地诱导小

2、鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化，诱导效率为90%；分化的心肌细胞自发而有节律地收缩，心肌肌钙蛋白T(cTnT)、α-辅肌动蛋白(a-actinin)、肌动蛋白(actin)表达阳性。此外，分化的心肌细胞还表达调控心肌发育的基因a-MHC、ß-MHC。结论　抗坏血酸能有效地诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞。关键词:小鼠胚胎干细胞；心肌细胞；抗坏血酸；细胞培养中图法分类号：文献标识码：AAscorbicacidinducesdifferentiationofmouseembryonicstemcellsintocardiacmyocyt

3、esLIJie，ZHANGYi-ming,LIUYing,XIAHui，YUChang-hai(DepartmentofCardio-thoracicSurgery,Thefirstaffiliatedhospital,PLAGeneralHospital,Beijing100037,China)Abstract:objectiveToevaluatedascorbicacidforitspotentialtoinducecardiacdifferentiationofmouseembryonicstemcells(mEScells).M

4、ethodsUndifferentiatedmouseembryonicstemcellsgrewconfluentandweredigestedbytypsintosinglecelltoformembryoidbodies(EBs)byrotarycellculturesystem(RCCS).Afterplated,EBswasinducedbyascorbicacid,alsoknownasvitaminC,intocardiomyocytes.Underlightmicroscope,cardiomyocytesdisplaye

5、dspontaneousandrhythmiccontractileactivityandwereidentifiedbyimmunohistochemistry、confocallaserscanningmicroscopy(CLSM)andRT-PCR.Results.Aftertreatmentwithascorbicacid,thenumbersofbeatingcellsweremarkedlyincreasedandtheratioofinductionwasupto90%.Cardiomyocyteswerestainedp

6、ositivelyforcTnT，a-actininandactinbyimmunohistochemistry，confocallaserscanningmicroscopy.Furthermore,cardiomyocytesinducedbyascorbicacidexpressedcardiacgenes,includinga-MHC、ß-MHC.ConclusionAscorbicacidcouldinduceeffectivelycardiacdifferentiationfrommEScells.KeyWords：mouse

7、embryonicstemcells;cardiomyocyte;ascorbicacid;cellculture获得足够数量、不引起免疫排斥反应且具有再生活力的心肌细胞是开展组织工程研究的前提和基础。胚胎干细胞(embryonicstemcell，ESC)是从早期哺乳动物囊胚的内细胞团发育而来,在体外具有无限增殖能力和发育的全能性。胚胎干细胞作为心肌组织工程的种子细胞来源，除需要对拟胚体（embryoidbodies，EB）进行规模化扩增以获得足够数量ES细胞此外，还需要将获取的ES细胞在一定条件下，定向诱导分化为心肌细胞才有望用于心肌

8、组织的体外构建研究。目前，EBs的制备方法有限，包括悬滴培作者简介：李捷，男，山东省日照市人，医学博士，主治医师。主要从事心肺移植及肺部外科，发表论文9篇。电话：(010)66848361Em