诱导小鼠多能干细胞分化为角膜上皮细胞的实验研究

《诱导小鼠多能干细胞分化为角膜上皮细胞的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中图分类号密级诱导小鼠多能干细胞分化为角膜上皮细胞的实验研究Studyondifferentiationofmuseinducedpluripotentstemcellsintocornealepithelialcells计：学位论文：32页表格：1个插图：7幅孟凌志指导教师：马翔教授申请学位级别：硕士学位学科(专业)：眼科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二。一三年五月答辩委员会主席：大连医科大学硕士学位谚趸独创性声明人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经

2、发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：重．堕查：签字日期：赳年上月盟Et大连医科大学硕士学位论文关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内

3、打“4”)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密吐作者签名：刍蛘、导师签名：日期：删年厂月赡日日期：少翻；年罗月≯眵日目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯OOOOOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3(、一)日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯一(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．材料⋯

4、···⋯⋯·⋯⋯·····⋯·····⋯⋯···⋯····⋯⋯⋯·⋯⋯··41．1主要仪器及设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．2主要实验试剂及耗材⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41．3试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．1滋养层细胞的复苏⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．2鼠iPSCs的复苏⋯⋯000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．3鼠iPSC的扩增培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62．4鼠ips细胞的冻存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．5鼠iPSC的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82

5、．6鼠源iPSC定向诱导分化为角膜上皮细胞⋯⋯⋯⋯⋯102．7诱导分化后角膜上皮细胞的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．鼠IPSCs的生长形态及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯132免疫荧光检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143RT-PCR检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19三、综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOm⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯21(一)综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27四、附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31五、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32大连医科大学硕士学位论文诱导小鼠多能干细胞分化为角膜上皮细胞的实验研究硕士生姓名：孟凌惠指导教师：马翔教授专业名称：眼科学摘要目的：探讨鼠源诱导多能干细胞(miceinducedpluripotentstemcells，miPSCs)通过与小鼠角膜基质细胞共培养途径诱导分化为角膜上皮的可行性，检钡UmiPSCs向角膜上

7、皮细胞分化后形态学变化以及部分标志蛋白表达的变化，为研究miPSCs向角膜上皮的分化提供实验依据。方法：购买小鼠ips细胞株和辐射后小鼠胚胎成纤维细胞株(mouseembryonicfibroblastMEF)，使用饲养层细胞法培养扩增小鼠来源ips细胞。应用Westernblotting法检测诱导分化前鼠源ips细胞多能性标志性蛋I兰tOct4、Nanog署llSox2的表达以进行鉴定。体外分离，增殖小鼠角膜基质细胞。将鼠源iPSCs在体外环境与小鼠角膜基质细胞共培养以诱导分化。应用倒置显微镜观察诱导分化l周后miPSCs的形态学变化，