负性协同刺激分子b7-h4在c3h10t12移植治疗eae中作用机制的研究

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1、jinASOOCHOWUNIVERSITY.、、八丨立论文论文题研究生姓名汲晓沛指导教师姓名薛专业名称神经病学研究方向神经免疫干细胞论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，狯立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：'i^hf日期：^fjL苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集

2、、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和绝质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密论文论文作者签名：)編日期：，^负性协同刺激分子B7-H4在C3H10T1/2移植治疗EAE中作用机制的研究中文摘要负性协同刺激分子

3、B7-H4在C3H10T1/2移植治疗EAE中作用机制的研究中文摘要目的：通过体外实验探讨靶向干扰B7-H4分子前后C3H10T1/2（以下简称C3H10）细胞对T细胞亚群的影响，并观察C3H10细胞的生存、增殖、迁移等生物学行为的改变；进一步通过体内实验探讨B7-H4在C3H10细胞移植治疗小鼠EAE模型中体内效应的机制。方法：1、用慢病毒将B7-H4靶向shRNA转染至C3H10细胞构建小鼠B7-H4靶向shRNA稳定转染的C3H10细胞(C3H10-B7-H4细胞)，应用Ki-67检测靶向干扰B7-H4分子前后C3H10细胞增殖情况；用细胞计数法绘制生长曲线的变化，观察细胞增殖

4、能力的改变；应用流式细胞仪检测B7-H4对C3H10细胞表面趋化因子受体CXCR4的表达的影响，用划痕实验观察C3H10细胞迁移能力的改变；将转染前后的细胞分别与小鼠脾脏淋巴细胞共同培养，用ELISA检测其对T细胞亚群的影响。2、利用MOG35-55和完全弗氏佐剂制备小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型，将n=50只小鼠分为正常对照组（n=10）、EAE组（n=10）、C3H10组（移植C3H10细胞）（n=10）、C3H10-NC组（移植shRNA对照质粒转染的C3H10细胞）（n=10）、C3H10-B7-H4组（移植C3H10-B7-H4细胞）（n=10），之后每日对各组

5、小鼠进行神经功能缺损评分，在免疫后第6天，按1×106/只细胞数量移植入分小鼠体内；在小鼠发病的急性期及慢性加重期，用流式细胞仪检测各组小鼠外周血细胞上B7-H4的表达变化；用ELISA法检测外周血可溶性B7-H4（sB7-H4）、IL-2、IL-17、IFN-γ、IL-4的表达变化；收集小鼠脾脏组织，流式细胞仪检测各组脾脏细胞上B7-H4的表达变化；结合神经功能评分观察不同干预方式对EAE损伤组织结构和功能的影响，明确B7-H4分子在C3H10移植治疗EAE体内效应的机制。结果：1、B7-H4靶向shRNA转染C3H10可抑制其B7-H4的表达；下调表达B7-H4后C3H10细胞内

6、的Ki-67表达减少，达到对数生长期的时间延长，增殖能力减弱；下调表达B7-H4后C3H10细胞表面趋化因子受体CXCR4表达减少，划痕愈合减慢，I中文摘要负性协同刺激分子B7-H4在C3H10T1/2移植治疗EAE中作用机制的研究迁移能力减弱；下调表达B7-H4的C3H10细胞对淋巴细胞的分泌B7-H4、IL-2、IL-17、IL-4、IFN-γ的抑制作用减弱。2、正常对照组小鼠未见发病，EAE组小鼠发病时间较其他组早，并且神经功能评分高；C3H10-B7-H4组发病时间及神经功能评分均介于C3H10组及EAE组之间；EAE组小鼠外周血及脾脏中CD19+B7-H4+B细胞数量均较正

7、常组增加，C3H10-B7-H4组介于C3H10组及EAE组之间；EAE组小鼠血浆中可溶性B7-H4表达较正常组低，IL-4在这五组小鼠体内表达的差异不大；IL-2、IL-17、IFN-γ的表达在EAE组小鼠较正常组小鼠明显升高，其中C3H10细胞治疗后可以抑制IL-2、IL-17的表达，下调表达B7-H4的C3H10细胞治疗后对这些分子表达的抑制作用减弱。结论：1、B7-H4分子参与了C3H10细胞对T细胞增殖、活化的抑制过程，这一过程可能是通过对可溶性