协同刺激分子b7-h4在胃癌组织中表达及其临床意义

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1、协同刺激分子B7--H4在胃癌组织中的表达及】e临床意义中文摘要协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及其临床意义中文摘要胃癌是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一，江苏省胃癌的发病率和死亡率明显高于全国水平。尽管治疗手段及水平不断提高，但治疗效果尚不理想，寻找新的胃癌预后指标和探索新的治疗思路是十分紧迫的科学命题。胃癌复发与转移是胃癌治疗失败的主要原因，对于肿瘤微环境的深入研究是提高胃癌5年生存率的重要途径。有效的肿瘤免疫应答，除提供第一信号外，还需要协同刺激分子参与并提供辅助的第二信号，才能使T细胞达到生理活化阈

2、值。适宜的协同刺激信号可以降低T细胞活化时对第一信号的需求，而抑制性的协同刺激信号可以减弱免疫应答或导致免疫耐受。协同刺激分子B7-H4是B7家族中的一个新成员，主要表达在巨噬细胞、成熟的树突状细胞和某些肿瘤细胞以及活化的T细胞上，它可通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期负性调控T细胞的免疫应答，并在介导肿瘤免疫应答过程中发挥重要作用，肿瘤细胞表达的B7--I-14可能参与了肿瘤的形成与进展。因此，干预协同刺激分子B7--H4将成为胃癌治疗的新策略。细胞因子激活的杀伤细胞(Cytokine-induce

3、dKillerCells，CIK)是一类能调节和增强机体免疫功能的新型抗肿瘤效应细胞，作为治疗性免疫细胞业已在临床广泛应用，但治疗性细胞进入机体后必然受到肿瘤微环境的影响，而负性协同刺激分子的表达与CIK细胞治疗是否存在关联至今尚未明了。本文首先探讨了协同刺激分子B7-H4在胃癌肿瘤组织中的表达对胃癌预后的关系，分析了B7-H4在胃癌表达的I临床意义，并进一步研究了B7--H4在胃癌肿瘤组织中的不同表达及对胃癌患者采用CIK细胞免疫治疗效果的影响，确立了CIK细胞临床治疗的纳入标准，为深入探索干预协同刺激分子B7

4、-H4在胃癌综合治疗中的可能作用机制奠定了基础。中文摘要协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及其临床意义第一部分协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中表达及其与预后的关系【目的】检测胃癌组织中协同刺激分子B7--H4的表达，探讨协同刺激分子B7--I-14的表达与胃癌临床病理因素及患者生存时间与预后的关系。【方法】应用免疫组织化学染色，检测156例胃癌患者手术标本qbB7-H4的表达；应用生物技术，体外诱导白体细胞因子激活的杀伤细胞(Cytokine-inducedkillercells，CIK)进行免疫治疗胃癌

5、。【结果】B7-H4在胃癌组织中阳性表达率为44．9％；单因素分析显示，B7-H4的表达与性别、年龄、组织学类型、病理分级、肿瘤大小等均无明显相关；但浸润深度和淋巴结转移与B7-／-14阳性表达显著关联，侵入肌层组的B7心阳性率高于未侵入组(49．1％坩16．7％)，差异有统计学意义(f=8．467，P---0．004)，淋巴结转移组B7-H4阳性率高于未转移组(f=17．339，P<0．O001)。与B7-H4高表达组相比较，B7m4低表达组胃癌患者中位生存时间显著延长13个月，差异有统计学意义(#=12．38

6、，P

7、目的】建立实时荧光定量PCR检测协同刺激分子B7-／-14基因表达的方法。【方法】采用自行设计的检测协同刺激分子B7-H4及内参照基因GAPDH的引物及TaqMan探针，经优化反应体系及反应条件后，用于检测B7书4及GAPDH的基因表达水平。将B7-H4和内参照基因GAPDH的PCR扩增产物经测序鉴定正确并纯化后分别与pMDl9-T载体连接，分别克隆构建含B7-H4及GAPDH基因片段的重组质粒，作为实时荧光定量PCR检测B7心及GAPDH基因表达的标准品。将重组质粒标准品进行定量及梯度稀释，建立标准曲线。【结果

8、】PCR扩增产物分别经测序证实为B7--H4及GAPDH基因的特异性片段。该n垫旦型塑坌王呈!羔!垄亘鳖筌堡!竺室垄垄基堕盎童墨!茎塑茎法检测B74-14基因表达的灵敏度为527copies／ml，线性范围为5．27x102-5．27x107copies／ml，标准曲线方程为：Y=-3．1395X+41．805，直线回归相关系数r=0．995，批间变异系数范围为2．39％