负性协同刺激分子b7-h1在人结直肠癌表达的调控机制

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3、舌机体在抗肿瘤、抗感染和自身免疫疾病时，主要通过活化的T淋巴细胞发挥作用。T细胞的活化不仅需要TCR与抗原肽一MHC复合物作用产生的第一信号，还需要抗原提呈细胞(APC)表面B7家族协同刺激分子与T细胞上的相应配体结合产生的第二信号。协同刺激分子与配体结合产生正性或负性信号，调节T细胞活性，进而调控机体的免疫反应。负性协同刺激分子B7一H1在多种肿瘤中表达上调，通过介导肿瘤细胞免疫逃逸而促进肿瘤的发生和发展。研究发现，抑癌基因PTEN通过负性调控P13K／Akt通路，在调节细胞生长、增值过程中发挥了重要作用。在神

4、经胶质瘤中，PTEN分子表达缺失使得P13K／Akt通路被激活，从而通过转录后调节机制上调B7．H1的表达。microRNA(miRNA)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA，通过与靶mRNA的3'-UTR互补结合，在转录后水平调控基因翻译，在基因表达中发挥着重要的作用。有些异常表达的miRNA参与了肿瘤的发生与进展。本课题主要研究人结直肠癌中异常表达的miRNA通过调控PTEN途径对B7一H1分子表达的间接调控作用。第一部分人结直肠癌中miR．20b和miR一130b通过抑制PTEN途径介导B7．H

5、1分子上调表达的机制【目的】探讨miRNA通过调控PTEN途径对B7．H1在结直肠癌表达的作用。【方法】首先采用免疫组化法测定101例结直肠癌中B7一H1和PTEN的表达，并对其进行相关分析。然后，采用miRNA芯片技术测定6例结直肠癌组织及癌旁组织中miRNA的表达量，统计分析癌组织中异常表达的miRNA。在这些miRNA中，使用生物信息学软件预测可能与PTEN基因3'-UTR作用的miRNA。最后，采用双荧光素酶报告基因系统分析这些miRNA对PTEN基因表达的调控作用。中文摘要负性协同刺激分子B7。Hl在人

6、结直肠癌表达的调控机制【结果】(1)B7一H1在44．6％的结直肠癌组织中表达，并且与PTEN的表达水平显著相关(卢0．002)；(2)结直肠癌组织中有30条miRNA表达明显高于癌旁组织，其中miR．20b、miR一130b、miR一18a和miR一18lb可能与PTEN基因3'-UTR结合；(3)构建了含PTEN基因3'-UTR的荧光素酶重组载体，通过酶切和基因测序的方法鉴定『F确，进一步的研究发现，miR一20b和miR．130b可以通过与含PTEN基因3'-UTR的荧光素酶重组载体结合而抑制其活性。【结论

7、】结直肠癌组织中，B7一H1表达升高，并与PTEN表达显著相关。体外实验证实miR一20b和miR一130b与PTEN基因的3'-UTR结合后抑制其分子表达。提示这两个miRNA通过抑制PTEN表达导致B7一H1分子在肿瘤组织中异常表达。第二部分人结直肠癌中B7-H1基因突变影响miR一570结合导致B7一H1分子的表达【目的】研究人结直肠癌中B7．H1基因突变影IINmiRNA结合导致B7．H1分子异常表达的作用。【方法】采用DNA测序法测定结直肠癌组织中B7一H1基因3’一UTR的变异；然后采用生物信息学软件

8、预测可能与碱基变异位点结合的miRNA；最后，采用体外功能实验研究miRNA对B7一H1基因表达的抑制作用，以及基因突变对miRNA调控作用的影响。【结果】(1)B7。H1基因3’一UTR在37．5％(6／16)的结直肠癌组织中存在一个G>C点突变，该突变位于miR．570的结合靶点内；(2)miR一570能显著抑制B7一H1+／SGC．7901人胃癌细胞$口i37．H1