mir-133b调控ctgf表达在结直肠癌上皮间质转化中的作用机制研究

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1、万方数据中图分类号UDCR735．3610八年制学位论文学校代码10533miR-I33b调控CTGF表达在结直肠癌上皮间质转化中的作用机制研究microRNA一133binhibitsCTGFandregulatingEMTincolorectalcancer作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：郭一航临床医学外科学中南大学湘雅三医院李小荣教授答辩委员会主席中南大学2014年05月万方数据学位论文原创性声明

2、lIIIIHIi11111IIIIIIIilIH04Y2688673本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人

3、在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：叠型日期：型年—白望日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和

4、借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：社导师签丝日期：巡年』月4日万方数据八年制学位论文中文摘要miR-133b调控CTGF表达在结直肠癌上皮间质转化中的作用机制研究摘要研究背景：结直肠癌是世界上高发的消化道恶性肿瘤之一，死亡率高。我国结直肠癌发病率逐年上升，严重影响生活质量，危害人们的生命健康。结直肠癌致病致死的主要原因是肿瘤的转移，而肿瘤细胞发生上皮问质转化(Epithelial—mesenchymaltrans

5、ition，EMT)是肿瘤转移的关键所在。EMT是指具有上皮表型的细胞在多种生理或病理因素的刺激下，上皮结构消失，失去细胞极性和紧密连接，表现为细胞内骨架成分重排并获得移行能力等问质细胞的特性，转化为间质表型细胞的现象。研究发现，EMT现象在多种恶性肿瘤的侵袭和远处转移中存在，说明两者有着密切的联系。microRNA(miRNA)是一类内源性并且高度保守的非编码小分子RNA，大小约22个核苷酸左右，通过与靶基因mRNA3’．UTR的碱基互补配对后，抑制mRNA翻译过程或促进mRNA的降解，能抑制靶基因在转录后水平的表达，从而调控基

6、因发挥生物功能。目前对miRNA的生物学功能众说纷纭，研究主要集中在miRNA调节生物体生长、发育、细胞分化、凋亡及肿瘤形成等众多方面，尤其在某些恶性肿瘤当中，miRNA可以调控不同的靶基因的特性，使得其能够来充当类似于原癌或抑癌基因的角色。最近的研究结果证实，miRNA一133b(miR一133b)的表达异常是肿瘤发生发展的重要环节，对肿瘤形成有促进作用，miR-133b在结肠癌中的差异表达已经被报道，但是其在结直肠癌中致癌、肿瘤转移机制及作用尚未完全明确。方法：本研究小组前期研究已经证实，miR-133b是一种新发现的在结直肠

7、癌中具有抑瘤作用的miRNA，但仍有许多关键的问题没有得到解答，需进一步深入研究。本课题在前期工作的基础上，拟开展研究工作如下：1)通过靶点验证及细胞功能验证，对miR．133b在结直肠癌中的作用靶点进行系统分析和深入的研究，有望阐明miR一133b在结直肠癌中的作用机理；2)通过在结直肠癌标本中检测miR-133b及其靶基因的表达特征，分析miR-133b与结直肠癌各病理指标及临床指标之间的关系；3)通过结直肠癌EMT过程中的分子调控机制分析结直肠癌转移的可能原因。万方数据八年制学位论文中文摘要实验结果：1．miR-133b与C

8、TGF在结直肠癌中的靶点验证生物信息学预测及基因芯片结果提示miR-133b的潜在靶基因参与TGF．B和Colorectalcancerpathway等通路。综合分析数据并进一步选择CTGF基因进行验证。实时荧光定量PCR(Real—timePCR)检测SW620、HT29细胞转染miR-133b过表达模拟物(mimics)和抑制表达载体(inhibitor)后靶基因的表达。结果初步提示miR-133b靶基因为CTGF。双荧光素酶实验：构建了含CTGF与miR-133b结合位点序列及其缺失突变型的pYr．Mir载体，运用双荧光素酶

9、报告基因实验进行分析，结果提示：CTGF是miR．133b调控的靶基因。Western．blot证实转染miR-133b前后CTGF蛋白表达下调，表明：CTGF受miR-133b的转录后调控。2．miR-133b与CT(、F在结直肠癌中的表达及临床