microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究

microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究

ID:33163868

大小:26.78 MB

页数:132页

时间:2019-02-21

microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究_第1页
microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究_第2页
microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究_第3页
microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究_第4页
microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究_第5页
资源描述:

《microrna-223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、南方医科大学2009级博士学位论文MicroRNA.223在结直肠癌侵袭和转移中的分子调控机制研究MolecularmechanismoftheregulationofmicroRNA一223intheinvasionandmetastasisofcolorectalcarcinoma课题来源:自选专业名称病理学与病理生理学学位申请人张小静指导教师丁彦青教授梁莉副教授答辩委员会主席张雅洁教授答辩委员会成员钟雪云教授论文评阅人王连唐教授薛玲教授李学农教授2012年5月24日广州博士学位论文MicroRNA.223在结直肠癌侵

2、袭和转移中的分子调控机制研究博士研究生:张小静导师:丁彦青教授梁莉副教授摘要研究背景和目的结直肠癌是世界上常见的恶性肿瘤之一,目前对结直肠癌的治疗以手术为主,辅以放化疗,但疗效欠佳,其5年生存率仍只在50%.70%,而中晚期结直肠癌治疗效果更差。转移是影响患者疗效和死亡的主要原因,临床上多数结直肠癌患者在进行根治性手术前已出现微转移,并且是结直肠癌术后转移和复发的直接原因。但目前缺乏检测微转移的有效方法,因此对结直肠癌转移的分子机制进行深入研究,是结直肠癌研究的重要内容。MicroRNA(miRNA)是一种大小约19.25

3、个碱基的非编码微小RNA。近年来的究显示,miRNA通过抑制特定的癌基因或抑癌基因,在肿瘤的发生发展中起着重要作,目前miRNA在肿瘤中的研究已成为一个新热点。大量文献报道人类癌症中存在miRNA的异常表达,例如在乳腺癌、结直肠癌等多种癌症中miRNA的差异表达谱相继被报道。miRNA对基因的转录后表达调控是21世纪的一个突破性科学发现,miRNA通过靶定癌基因或肿瘤抑癌基因,发挥着类似肿瘤抑制因子或癌基因的作用,参与肿瘤的转化、生长、血管生成及EMT等多种过程。miRNA与其调控的mRNA并非一对一的关系,每个miRNA

4、有许多靶点mRNA,而每个mRNA受多种miRNA的调节,两者之间形成一个复杂和相互关联的调控网络。摘要本课题利用miRNA芯片从结直肠癌组织中筛选出miR-223作为结直肠癌转移候选miRNA,明确miR.223在结直肠癌侵袭、转移中的作用,主要内容如下:(1)筛选及验证结直肠癌转移相关的miRNA;(2)预测及鉴定miR.223的靶基因,明确其在结直肠癌侵袭和转移的作用;(3)确定miR.223的上游调控因子,探讨两者间的相互调控关系。本课题旨在揭示一个新的miR一223表达调控机制,阐明miR.223在结直肠癌演进中

5、的作用机制,为临床抗结直肠癌侵袭、转移提供新的miRNA和基因靶点。研究方法1、结直肠癌中异常表达miRNAs筛选及验证采用生物芯片初步筛选在结直肠癌组织中表达明显改变的转移相关miRNAS并且利用荧光定量PCR验证miR.223在结直肠癌组织中的表达情况。2、miR-223的作用靶点的预测及鉴定以miR.223为检索词,利用数据库MiRanda、TargetScan、DIANA.microT、Pictar、及RNAhybrid对miR.223的靶基因进行预测,挑选软件交集较多及预测值较高的靶点,即FBX08作为研究对象,

6、利用双荧光素酶报告基因检测进行鉴定,最后利用荧光定量、westemblot分别检测miR.223和靶基因的表达,并且进行性关性分析。3、miR一223对结直肠癌细胞生物学行为的影响(1)利用阳离子脂质体法,将miR.223inhibitor瞬时转染至结直肠癌细胞株SW620和SW480中,利用westernblot检测FBX08的表达变化;(2)设计并构建miR-223慢病毒表达载体,进行病毒包装,感染至结直肠癌细胞株HT29及SW480中,经流式分选构建稳定表达的细胞株,利用Westernblot检测FBX08蛋白的表达

7、变化;(3)将miR-223慢病毒表达载体和不含3'UTR的FBX08编码区表达慢病毒载体共转染至结直肠癌细胞株HT29及SW480中,构建稳定表达的细胞株,II博士学位论文利用Westernblot检测FBX08的表达变化;(4)利用MTT法、细胞凋亡检测和体外侵袭实验,检测miR-223抑制后对体外结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;(5)利用MTT法、平板克隆形成、细胞凋亡检测和体外侵袭实验,检测miR.223表达载体及miR.223和FBX08(不含3'UTR)共表达载体转染后对体外癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的

8、影响;(6)利用整体可视化动物模型,检测miR.223表达载体及靶点miR.223和FBX08(不含3'UTR)共表达载体转染后对裸鼠皮下成瘤能力的影响;(7)利用免疫组化检测FBX08在结直肠癌组织中表达情况。4、miR.223上游调控因子的预测及验证寻找miR.223上游启动子的基因组序列,利用软件

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。