mir-30a对结直肠癌细胞侵袭和转移的影响及其相关分子机制的初步研究

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1、学校代码10459学号或申请号201212443287密级公开硕士学位论文miR-30a对结直肠癌细胞侵袭和转移的影响及其相关分子机制的初步研究作者姓名：靳慧芳导师姓名：秦东春教授学科门类：医学专业学位名称：临床检验诊断学培养院系：郑州大学第一附属医院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMaster(doctor)MolecularmechanismoftheregulationofmiR-30aintheinvasionandmetastasisofcolorectalcarcin

2、omaBy：HuifangJinSupervisor:Prof.DongchunQinClinicalLaboratoryMedicineTheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversityMay2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：f日期：訓5年彡月日学位论文使用授权声明本人在导师

3、指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者••日期：到5年5月对曰摘要miR-30a对结直肠癌细胞侵袭和转移的影响及其相关分子机制的初步研究研究生：靳慧芳导师：秦东春郑州大

4、学第一附属医院河南郑州450052摘要目的研究miR-30a对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响并初步探讨其可能的分子机制。方法1miR-30a的相对表达量采用茎环实时荧光定量PCR技术检测不同转移能力的结直肠癌细胞株中miR-30a的相对表达量，初步分析其与结直肠癌的转移是否相关。2miR-30a对结直肠癌细胞侵袭迁移的影响1）构建pre-miR-30a过表达的慢病毒颗粒，并感染miR-30a表达量较低的SW620。荧光显微镜观察转染情况，实时荧光定量PCR检测转染效率。2）利用划痕实验检测过表达miR-30a后SW620的迁移特性，Transwell小室侵袭实验检测其侵袭性。

5、3miR-30a抑制结直肠癌侵袭迁移的分子机制1）miR-30a作用靶点的预测以has-miR-30a为检索词，利用数据库Targetscan、miRanda(microRNA.org)、miRDB对miR-30a进行靶基因的预测，挑I摘要选软件交集较多以及预测值较高的作为靶点，即AEG-1/MTDH作为研究对象。2）Westernblot检测过表达miR-30a后AEG-1/MTDH蛋白表达水平，实时荧光定量PCR技术检测相应AEG-1/MTDHmRNA的相对表达量。4统计学分析采用SPSS17.0软件进行统计学分析，实验数据均以均值±标准差（x±s）表示，采用两组独立

6、样本t检验进行两组间差异的比较，采用单因素方差分析进行多组计量间资料比较，采用LSD-t检验进行两组间资料的比较，检验水准α=0.05。结果1．相对于SW480（1.00±0.00）而言,miR-30a在Caco2中的相对表达量为0.88±0.084，差异没有统计学意义（t=2.547,p=0.126）；在转移性细胞系（HT-29、HCT116和SW620）中的相对表达量均显著降低，分别是0.74±0.081；0.37±0.055；0.29±0.040，差异均具有统计学意义（tHT-29=5.600，P=0.030；tHCT-116=19.92，p=0.002；tSW62

7、0=30.74，p=0.001）其中在高度恶性的SW620细胞系中表达最低。2．生物学软件分析miR-30a可能的靶点是AEG-1/MTDH；在SW620中转染pre-miR-30a后AEG-1/MTDHmRNA和蛋白的表达量明显下降，差异具有统计学意义。结论1．miR-30a在结直肠癌细胞中低表达，而且低表达可能预示着结直肠癌的转移。2．miR-30a可能通过下调AEG-1/MTDH来抑制结直肠癌细胞的侵袭和转移。关键词：miR-30a；AEG-1/MTDH；侵袭；转移；结直肠癌细胞IIAbstractMolecularme