elongator对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目_________Elongator对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究研究生姓名徐溢指导教师姓名魏文祥专业名称细胞生物学研究方向基因的转录与调控论文提交曰期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标

2、明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学V本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情拫中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被査阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在____

3、年__月解密后适用本规定。非涉密论文i论文作者签名:日期：加心.?导师签名:2日期：^Elongator对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究中文摘要中文摘要目的：通过研究Elp3过表达和Elp3干扰表达的HepG2细胞株以及Elp4过表达和Elp4干扰表达的HepG2细胞株的迁移侵袭能力的改变，探讨Elp3和Elp4对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其分子机制。方法：1.鉴定Elp3干扰质粒GV248-Elp3i和Elp4干扰质粒GV248-Elp4i，以及Elp3过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp3o和Elp4过表达质粒pF

4、LAG-CMV4-Elp4o。r2.确定肝癌细胞HepG2的Puro和G418药物筛选浓度。r3.转染干扰质粒后的HepG2细胞经Puro筛选得到Elp3稳定干扰细胞株和Elp4稳定干扰细胞株；转染过表达质粒后的HepG2细胞经G418筛选得到Elp3过表达稳定细胞株和Elp4过表达稳定细胞株。4.通过RT-PCR、Real-timePCR和Westernblot鉴定各组细胞株中外源质粒的整合，检测Elp3和Elp4的mRNA和蛋白表达水平。5.划痕实验，Transwell侵袭迁移实验检测各细胞株迁移和侵袭能力的改变。6.Real

5、-timePCR检测各细胞株中MMP-2、MMP-9和Paxillin的mRNA表达水平。7.Westernblot检测各细胞株中PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2、MMP-9和Paxillin的蛋白表达水平。8.Westernblot检测瞬时转染不同剂量Elp3过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp3o、Elp4过表达质粒pFLAG-CMV4-Elp4o、Elp3干扰质粒GV248-Elp3i和Elp4干扰质粒GV248-Elp4i的细胞株中PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平。9.通过Westernblot检测PI

6、3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平确定肝癌细胞HepG2的PI3K/AKT途径抑制剂LY294002的浓度。10.划痕实验，Transwell侵袭迁移实验检测抑制剂LY294002处理后的各细胞株迁移和侵袭能力的改变。I中文摘要Elongator对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其机制研究11.Real-timePCR检测抑制剂LY294002处理后的各细胞株中MMP-2和MMP-9的mRNA表达水平。12.Westernblot检测抑制剂LY294002处理后的各细胞株中PI3K、AKT、p-AKT、MMP-2和MMP-9的蛋白表

7、达水平。结果：1.质粒经双酶切鉴定，成功检测到Elp3过表达质粒：pFLAG-CMV4-Elp3o中1601bp的重组Elp3条带；Elp4过表达质粒：pFLAG-CMV4-Elp4o中1613bp的重组Elp4条带；Elp3干扰质粒：GV248-Elp3i中44bp的shRNA条带；Elp4干扰质粒：GV248-Elp4i中44bp的shRNA条带。r2.HepG2细胞于含不同浓度G418或Puro的培养基中培养14天后，得出r50ng/μl为Puro药物筛选浓度，600ng/μl为G418药物筛选浓度。r3.HepG2细胞转染

8、各组质粒24h后，加入G418或Puro筛选14天，经单克隆挑取和单克隆扩大培养及鉴定，得到目标细胞株。4.划痕实验和Transwell实验证明了Elp3和Elp4过表达能促进肝癌细胞的迁移能力和侵袭能力，干扰Elp3和Elp4则抑制肝癌细胞的迁移