mir--185对胃癌细胞侵袭转移的影响及分子机制

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1、miR-185对胃癌细胞侵袭转移的影响及分子机制1南平大学附属第二医院肝胆内科湖南衡阳4210012南平大学附属第二医院消化内科湖南衡阳421001衡阳市科技局资助项目，项目基金号：2015KS32。附第一作者：屈小勇(男，33岁，医学硕士，主治医师，南华大学附属第二医院肝胆外科通讯作者：谭伟(主治医师、医学硕士，421001、湖南省衡阳市雁峰区雁城路12号、衡阳市中心医院肾内科)【摘要1目的通过细胞生物学等方法深入探讨miR--185在人胃癌细胞的侵袭与转移中的作用，从而为胃癌的防治提供新思路。方法以人

2、胃癌细胞系SGC-7901细胞株及BGC-803细胞株为研究对象，分别转染miR-185模拟物及抑制物。应用实时荧光定量PCR技术，检测转染后miR--185mRNA的表达水平。通过CCK8方法检测miR-185对胃癌细胞侵袭转移的影响。结果miR-185在转染miR--185模拟物细胞中的表达水平高于阴性对照，差异有统计学意义(P<0.05)。miR-185在转染miR-185抑制物细胞中的表达水平低于阴性对照，差异有统计学意义(P<0.05｝。转染miR-185模拟物的细胞增殖率低于阴性对

3、照(P<0.05)，转染miR-185抑制物的细胞增殖率高于阴性对照(P<0.05)。细胞体外迁移能力检测结果显示，转染miR-185模拟物者穿膜细胞数(68.2±9.9)个,少于阴性对照的(125.4±19.4)个(P<0.05);细胞体外侵袭能力检测结果显示，转染miR-185模拟物者穿膜细胞数(49.2±8.7)个，少于阴性对照的(109.2±ll.3)个，差异有统计学意义(P<0.05)。细胞体外迁移能力检测结果显示，

4、转炎miR-185抑制物者穿膜细胞数(75.8±6.8)个，多于阴性对照的(35.4±6.3)个(P<0.05);细胞体外侵袭能力检测结果显示，转染miR-185抑制物者穿膜细胞数(68.2±6.5)个，多于阴性对照组的(31.7±5.9)个，差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR--185在胃癌细胞中明显低表达，并可能通过下调癌基因Cdc42的表达，抑制肿瘤细胞的增殖，从而发挥抑癌基因的功能。【关键词】：miR-185；胃癌细胞侵

5、袭转移；侵袭；分子机制【中图分类号】R715【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0441-02胃癌是人类常见的恶性肿瘤之一，目前已经证实某些癌基因和抑癌基因与其发生、发展密切相关，但目前对胃癌转移的分子机制仍不完全清楚，因此筛选其发生与转移的关键分子，对胃癌的防治具有重要的意义。微小RNA(microRNA,miR-NA)是一•种普遍存在于多种细胞生物中的内源性、非编码小RNA分子，长19一22个核苷酸，约占基因总数的2%[1]。近年来研究发现micmRNA可作为类似癌基因、抑

6、癌基因或其他方式调控肿瘤的发生、发展和转移过程[2】，这一发现为肿瘤转移的诊断和治疗提供了新的思路和靶点。艽中Cdc42基因可能为miR-185的新靶点，miR-185靶向作用于Cdc42基因可能会对胃癌的发生、发展产生重要的影响。miRNA--185是本课题组首次发现的一种从人胃癌细胞株中筛选到的miRNA，前期研究结果表明，miRNA--185在胃癌细胞中表达低下，但其在胃癌细胞中的侵袭与转移作用机制仍不完全明了。本研究拟通过细胞、分子生物学等方法深入探讨miR-185在人胃癌细胞的侵袭与转移中的作用

7、机制，从而为胃癌的防治提供新思路。1材料与方法1.1主要试剂和仪器。1640培养基、胎牛血清FBS及胰蛋白酶(HyClone公司)，人胃癌细胞株SGC--7901及MGC--803(中科院上海细胞库)，TRIzol试剂购自Invitrogen公司公司；miR-185荧光定量PCR试剂盒；逆转录所需的dNTPs及逆转录酶、lOObpDNALadderMarker；ABIPrism7000焚光定量PCR仪；Biophotometer生物分光光度计。组织、胃窦溃疡组织、胃窦炎性息肉及其癌旁组织的总RNA，Bio

8、photometer生物分光光度计检测RNA质量和浓度，1.2%的甲酸变性凝胶电泳[3】。1.2方法1.2.1总RNA提纯按TRIzol试剂说明书，采用TRizol一步法提取组织标本和细胞株中总RNA,DEPC水溶解RNA,使用ND--1000紫外/可见光分光光度计测量260nm(A260)和280nm(A280)下吸光度，对总RNA的质量进行鉴定，并调整RNA的浓度。本研究所提取组织和细胞株中总RNA样品的质量和浓度均符合P