zeb2对胃癌侵袭转移影响及其机制的研究

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1、原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的‘同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：茧壅丞日期：丑年生月型日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国

2、科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。日期：苎年』月卫日摘要第一章ZEB2、E．cadherin在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及意义IYJllllll2lJJIlllllllll9JIllllJ7lllll7lllrfl9112llllll目的：研究ZEB2、E．cadherin在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学法检测胃癌组织及非癌性胃黏膜组织中ZEB2、E．cadherin蛋白的表达，分析ZEB2和E．cadherin的表达与临床病理参数的关系，用Kaplan．Meier和Cox回归分析法进行生存分

3、析。采用实时定量PCR法检测人胃黏膜上皮细胞株GES．1及胃癌细胞株SGC7901和HGC27中ZEB2mRNA和E．cadherinmRNA的表达。结果：1．在胃癌组织中ZEB2阳性表达率(59．2％)明显高于非癌性胃组织(19．O％)，其表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P0．05)。Kaplan—Meier生存分析显示，ZEB2阳性表达组、阴性表达组患者术后平均生存时间分别为37．603+3．909mo，52．258+4．046mo：ZEB2阳性表达组患者的5年生存率明显低于阴性表达组患者，差异有统计学意义(P<

4、O．05)。2．在胃癌组织中E—cadherin阳性表达率(56．6％)明显低于非癌性胃组织(100％)，其表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期有关(PO．05)。Kaplan—Meier生存分析显示，E．cadherin阳性表达组、阴性表达组患盟±堂焦迨塞!主塞垣墨者术后平均生存时间分别为52．473+3．675mo，32．667+4．225mo；E．cadherin阳性表达组患者的5年生存率明显高于阴性表达组患者，差异有统计学意义(P

5、95，P=0．01)。4．胃癌细胞株中ZEB2mRNA的相对表达量高于人胃黏膜上皮细胞株GES．1(P

6、膜的恶性转变，在胃癌浸润转移中起一定的作用。3．在胃癌组织中ZEB2与E．cadherin的表达呈负相关性，ZEB2可能通过抑制E—cadherin的表达促进胃癌的转移。第二章靶向ZEB2基因的shRNA表达载体的构建及鉴定目的：构建靶向ZEB2基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达擅±堂焦途塞主塞垣蔓质粒，并进一步研究其对人胃癌HGC27细胞ZEB2表达的抑制效应。方法：设计3条靶向ZEB2基因的shRNA，经退火成互补双链，克隆到质粒pGPU6／GFP／Neo中构建重组载体(pGPU6／GFP／Neo．ZEB2．shRNAl，2，3)，经酶切鉴定和测序确认后，将3个重组表达载体利用

7、脂质体转染到人胃癌细胞株HGC27，采用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，利用Real．timePCR，Westernblot法检测转染前后ZEB2mRNA和蛋白表达的情况，并筛选出最佳抑制效率的shRNA表达质粒。结果：1．通过酶切鉴定和测序分析，靶向ZEB2基因的3个pGPU6／GFP／Neo-shRNA重组载体构建成功。2．重组质粒转染HGC27细胞后，经Real．timePCR检测，3个重组表达载体pGPU6／GFP／Neo