lsd1对结肠癌侵袭转移能力的影响及其机制的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR73．3610博士学位论文学校代码10533LSDl对结肠癌侵袭转移能力的影响及其机制的研究Theinfluenceoflysine—specificdemethylase1(LSD1)oninvasionandmetastasisofcoloncancerandtherelatedmechanisms作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：。r杰临床医学普通外科学湘雅医院廖国庆教授论文答辩日期』弦睦血卫7r答辩委员会主中南大学二0一三年十月万方数据原创性声明【lIIIIIIIIIIIIII1111111IIIIlY2

2、686021本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均己在论文中作了明确的说明。作者签名：二2鱼日期：蛆年上月斗日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手

3、段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者虢么隆翮签名血磴嗍业年鱼月H日万方数据博士学位论文中文摘要LSDl对结肠癌侵袭转移能力的影响及其机制的研究摘要背景：结肠癌的发病率整体呈上升趋势，目前已经成为第三常见的恶性肿瘤，死亡率居世界第四位，转移是导致死亡的主要原因。上皮间质转化(epithelialmesenchymaltransition，EMT)被认为在癌症转移的起始中发挥重要作用，在此过程中，上皮细胞获得成纤维细胞样特性，细胞极性消失，细胞问粘附作用减退，侵袭和运动能

4、力增强。转录因子snail(snail)、slug、twist、zebl和zeb2等能够诱导EMT的发生，促进肿瘤的转移。赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(1ysine-specificdemethylase1，LSDl)在转录因子Snail／Slug介导的上皮间质转化过程中不可或缺，没有LSDl的参与，Snail／Slug将不能有效抑制E钙黏蛋白的表达。LSDl是第一个被发现的组蛋白特异性去甲基化酶，从酵母到哺乳动物都十分保守，它能特异性地去除组蛋白H3第4位赖氨酸(H3K4)和组蛋白H3第9位赖氨酸(H3K9)的二甲基和一甲基修饰，通过组蛋白修饰途径影响靶基

5、因的表达。研究发现过表达LSDl能促进前列腺癌、乳腺癌等肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，但其与结肠癌的转移是否相关尚待检验。目的：在组织和细胞水平探讨LSDl、E一钙黏蛋白、N一钙黏蛋白的表达与结肠癌侵袭转移的相关性；通过RNAi技术和单胺氧化酶抑制剂在体外抑制LSDl的表达，观测其对结肠癌增殖、侵袭、凋亡的影响及E．钙黏蛋白、N．钙黏蛋白表达的影响；最后通过染色质免疫共沉淀技术探测LSDl影响结肠癌转移的分子机制。方法：1、利用免疫组化技术检测108例结肠癌组织中LSDl、E一钙黏蛋白、N一钙黏蛋白的表达情况，并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系。2、利用Tr

6、answell体外细胞侵袭实验检测结肠癌细胞株Lovo、SW620、HT-29、HCT-8、HCT-116和对照细胞(HEK293)的侵袭性，再利用Real．timeRT-PCR和Western-bloting实验方法检测LSDl、E一钙黏蛋白、N一钙黏蛋白在上述细胞中的表万方数据博士学位论文中文摘要达，分析其与结肠癌细胞侵袭性的相关性。3、利用RNAi技术和单胺氧化酶抑制剂在体外抑制结肠癌细胞(SW620)中LSDl的表达，采用MTT细胞增殖实验、Transwell细胞侵袭实验、FCM细胞凋亡实验检测抑制LSDl的表达对结肠癌细胞SW620增殖、侵袭、凋亡的

7、影响。4、利用染色质免疫共沉淀技术检测LSDl与SW620细胞、靶向沉默了LSDl基因或Tranylcypromine干预的SW620细胞中E钙黏蛋白启动子区域的结合丰度，并用WesternBlotting检测两者E钙黏蛋白启动子区域组蛋白H3K4me2水平。结果：l、LSDI、E．钙黏蛋白、N一钙黏蛋白在108例结肠癌组织中的阳性表达分别为72例(66．7％)，92例(85．2％)和45例(41．7％)，差异有统计学意义(z2=45．00，P<0．05)。LSDl在较晚TNM分期、远处转移的结肠癌组织中的表达率明显增高(氏0．05)，而E一钙黏蛋白的表达率则

8、明显降低(氏0．05)，在各项临床病理