沉默乙酰肝素酶对胃癌侵袭转移影响的体外研究

《沉默乙酰肝素酶对胃癌侵袭转移影响的体外研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中文摘要目的采用RNA干扰技术探讨沉默乙酰肝素酶(heparanaseHPa)对人胃癌细胞株SGC一7901转移和移动能力的影响。方法根据人HPa基因序列设计4个小干扰RNA(smallinterferingRNA，sirtNA)靶位点(HPal521、HPal324、HPal085、HPallll)，并构建了4个针对靶位点的一个载体编码一个短发夹状RNA(shRNA)质粒表达载体，同时合成了1个阴性对照质粒表达载体(shNC)和1个阳性对照质粒表达载体(shhGAPDH)，采用脂质体介导转染人胃癌细胞株SGC一7901，用Western—blot和RT—PCR检测转染前后乙酰肝素酶

2、蛋白和mRNA表达的变化，选出对乙酰肝素酶抑制效果最显著的质粒作为研究对象，利用其转染细胞SGC一7901，并用G418筛选稳定转染的细胞，扩增培养，应用Transwell小室侵袭试验和划痕损伤实验分别研究转染前后细胞SGC一7901侵袭、转移能力的变化。结果脂质体介导质粒HPal521、HPal324、HPal085、HPallll转染细胞后，转染后细胞乙酰肝素酶mRNA的表达量(HPamRNA光密度值与相应内参之比)分别为0．83s0．03、0．78±0．05、0．36s0．01、0．67±0．04，乙酰肝素酶蛋白表达量(HPa蛋白表达光密度值与相应内参之比)分别为0．87±0．

3、01、0．76±0．03、0．38±0．01、0．69s0．03D质粒HPal085对乙酰肝素酶的抑制作用较其它质粒显著，质粒HPal085转染SGC7901细胞后并用C,418筛选后，在Transwell小室侵袭试验中，转染组与正常对照组侵袭的细胞数分别为44±15．22和289．9±18．11，转染组侵袭细胞数较正常对照组显著减少(P

4、词RNA小分子干扰乙酰肝素酶SC,C一7901TheEffectofHeparanaseGeneSilenceontheInvasionandMetastasisofhumangastriccarcinomacellinVitroAbstractObjectiveToevaluatetheeffctofsilenceheparanaseontheinvasivenessinhumangas—triccarcinomacelllineSGC一7901usingRNAinterferenceteehnolog．MethodsFourtarge—tedlocations(HPal521、H

5、Pal324、HPal085、andHPalI11)weredesignedandfourplasmidvectorsexpressingshorthairpinRNA(shRNA)tartgetingHPawereconstructedaccordingtotranscriptionRNAlocationofhumanHPagenesequenceanddesigningprincipleofsmallin—terferenceRNA(siRNA)．Alsoanegativeandapositivecontrolplasmidvectorswerecon-stmcted．Theyw

6、eretransfectedintohumangastriccarcinomaSGC一7901ceilsmediatedbycationicliposomelipofectin：HPamRNAandproteinexpressionlevelsweredetectedbyRT—PCRandWesternblotting，respectively．TheplasmidthatremarkablyinhibitedheparanaseWasdecided．Aftertransfectedwiththisplasmid，positivecellcloneswereselectedwithG

7、418andamplefied．Stabletransfectedceilswereobtainedandroutinelymaintainedinselectionmediumtoavoidovergrowthofnon—transfectedcells．Invasiveandmobilitypowerwereevaluatedbe—foreandaftertransfactionbythemembranceinvasionculturesystem(T