乙酰肝素酶调控vegf-c的表达及其对胰腺癌体外侵袭凋亡的影响

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1、分类号：R735．9单位代码：10422密级：公开学号：201213606⑧∥雾办孑SHANDONGUNIVERSITY硕士学位论文ThesisforMasterDegree论文题目：乙酰肝素酶调控VEGF-C的表达及其对胰腺癌细胞体外侵袭凋亡的影响HeparanaseregulatesVEGF—CexpressionanditsimpactOilmetastasis。andapoptosisofpancreaticcancercellsinvitro作者姓名张斌培养单位医学院专业名称外科学(普外)指导教师曾庆东主任医师合作导师吕

2、斌副主任医师2015年5月10日万方数据JfUlllHlllIIIIIIUIIIIIIIIlU』Y2791886原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：日期：丕!生：生二至[关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学文论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的

3、复印件或电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：导师签名：丛日期：万方数据目录中文摘要1Abstract．．3符号说明。5前言．6材料与方法．81．1细胞培养与传代．．81．2设计并合成人HPSE基因过表达载体．．81．3设计合成针对HPSE基因的siRNA91．4脂质体介导的重组质粒、siRNA转染宿主细胞．．91．5Reversetransrciption—PCR

4、及Realtime—qPCR检测HPSE及VEGF—C的rnl州A水平一91．6Westernblot检钡UHPSE及VEGF—C蛋白的表达情况．．101．7细胞划痕实验与Transwell侵袭实验．．111．8流式细胞术检测HPSE抑制对细胞凋亡影响．111．9实验数据的处理．．11结果一122．1转染效率．122．2重组质粒及不同干扰片段对HPSE及VEGF—C的mRNA水平影响．122．3免疫印迹法检测各实验组HPSE与VEGF-C蛋白表达量的变化一122．4各实验组细胞体外侵袭迁移能力的变化．132．5抑审OHPSE对细胞

5、凋亡的影响13讨论．．14文献综述17附录．29参考文献．34致谢4l发表论文．42万方数据Cataloguechineseabstract．．1Englishabstract··--··-········-·······-··-3Symboldescription··-··········--······-5Introduction．6Materialsandmethods．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．81．1Cellculture

6、andpassage··81．2HPSEexpressionvectorconstruction81．3SynthesisofsiRNA···-91．4Transienttransfection91．5SemiquantitativePCRandReal—timequantitativePCR··91．6Immunoblottingassay101．7TranswellinvasionassayandScratch-woundassay·······························111．8Flowcytometr

7、y····-·····-···-··-······--····--··-······-··-······-·········-··111．9Statisticalanalysis······················-····················-···-··-···11Resultsl22．1Transfectionefficiency122．2TheinfluencesofGV230／HPSEandHPSE—siRNAsonmRNAlevelsofHPSEandVEGF．C．·122．3Expressiono

8、fHPSEandVEGF-Cproteins122．4BxPC一3cellsinvasionuponHPSEoverexpressionandsuppression132．5TheapoptosisofcellsuponHPSEinterferen