乙酰肝素酶基因表达增强大肠癌转化细胞侵袭能力的实

《乙酰肝素酶基因表达增强大肠癌转化细胞侵袭能力的实》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、乙酰肝素酶基因表达增强大肠癌转化细胞侵袭能力的实【关键词】乙酰肝素酶　　TheEnhancedEffectofHeparanaseGeneExpressionontheInvasiveAbilityofColorectalCancerTransformedCell　　Abstract：ObjectiveThisstudyancolorectalcancercelllinesHT29.Thecellgrober.Tumorigencityandorthotopicimplantationofhistologicallyintacttumorinnudemice'sileocecal

2、junctionindicatedtheinvasiveabilityofcolorectalcancertransformedcellbytheexogenousexpressionofheparanasegene.ResultsAfterbeingtransfectedbertestongthreekindsofcells.Inthesametime,theentityneoplasmm×9mm×10mm）islargerthanthecontrolgroup（6mm×8mm×6mm）.Theincidencesofthelivermetastases（71.43%）ishi

3、gherthanthecontrolgroup（14.29%）.TherateoftumorigencityandmetastasisinnudemiceanexogenousheparanasegenecanfacilitatetoenhancethegroetastasisincelllineHT29.　　Key；Transfection；Metastasis　　摘要：目的探讨外源性乙酰肝素酶基因对增强大肠癌HT29细胞转移侵袭能力的影响。方法乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)基因真核表达载体转染大肠癌HT29细胞，观察转化细胞增殖和侵袭能力的变化，通过转化细胞裸鼠异

4、种接种成瘤和实体瘤回盲部原位种植转移模型建立，观察乙酰肝素酶mRNA的表达对大肠癌HT29细胞侵袭性的影响。结果乙酰肝素酶基因转染细胞HT29Hpa较未转染细胞HT29和转染空载细胞HT29KZ生长速度明显加快；Boyden小室体外侵袭实验显示HT29Hpa细胞穿膜数（45.5±0.501）较HT29细胞（29.3±0.062）和HT29KZ细胞（30.1±0.247）增多，差异具有显著性(P<0.01)；转染细胞裸鼠皮下瘤生长速度明显加快；同期内HT29Hpa细胞形成的皮下瘤（12mm×9mm×10mm）较HT29细胞皮下瘤（6mm×8mm×6mm）大，HT29

5、Hpa细胞皮下瘤回盲部原位种植致肝转移率（71.43%）较HT29细胞肝转移率（14.29%）增高。两者间差异有显著性意义(P<0.01)。结论乙酰肝素酶基因外源性的表达，能促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。　　关键词：乙酰肝素酶；大肠癌；转染；转移　　0引言　　乙酰肝素酶（heparanase）是一种广泛存在于细胞外基质、密切参与肿瘤细胞生长和侵袭转移的葡萄糖醛酸酯酶，通过降解细胞外基质（extracellulermatrices，ECM）和基底膜（basementmembrane,BM）上起稳定作用的乙酰肝素（HeparanSulfateProteoglycans，HS

6、PGs），破坏基质正常的结构，使肿瘤组织易于扩散和转移[1,2]。研究表明，在原位癌、微浸润癌和浸润癌中都出现不同程度乙酰肝素酶的表达和基底膜的崩解[2]，肿瘤细胞中乙酰肝素酶的表达量与肿瘤浸润的深度存在相关性[3]。HT29细胞源于人大肠癌组织，为低分化腺癌，体外培养生长缓慢，转移率低。本研究将自行设计和构建的乙酰肝素酶真核表达载体转染大肠癌HT29细胞，观察转化细胞生物学特性变化，探讨乙酰肝素酶mRNA的表达对肿瘤细胞侵袭、转移能力的影响。　　1材料和方法　　1.1主要试剂　　Trizol、DMEM、脂质体购自Gibco公司；MTT、G418购自Sigma公司；RTPCR试

7、剂盒购自MBI公司；Matrigel凝胶及侵袭小室购自BD公司。　　乙酰肝素酶基因真核表达载体（pcDNA3Hpa）由本室构建，该重组质粒系由pcDNA3的EcoRⅠ位点间插入基因全长序列构成。地高辛加尾寡核苷酸标记盒，购自德国保灵曼公司。原位杂交试剂盒及免疫组化试剂盒，均购自武汉博士德公司。大肠癌细胞株HT29由第四军医大学消化病研究所保存；Balb/C（nu/nu）裸鼠购自中英合资上海西普－必凯实验动物有限公司，属T细胞缺乏型。　　1.2基因转染　　参照LipofectAM