肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究.doc

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1、肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究作者：涂响安，丘少鹏，邓春华，吕自力，胡斌，郑克立【摘要】目的实验证明乙酰肝素酶在多种恶性肿瘤中有高表达，并可能在恶性肿瘤细胞侵袭及转移中发挥重要作用。本研究探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平。结果乙酰肝素酶mRNA在肾癌中阳性表达11例(36.7%)，乙酰肝素酶蛋白在肾癌中阳性表达15例(24.2%)，其表达率与

2、肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论乙酰肝素酶基因和蛋白的异常表达可作为肾癌发生和发展的预后参数。【关键词】肾肿瘤；乙酰肝素酶；免疫组化；荧光定量PCRStudyofheparanasegeneandproteinexpressioninrenalcellcarcinomaABSTRACT:ObjectiveHeparanaseisoverexpressedinmanymalignanttumorcells,itmayplayapivotalroleininvasionandmetastasisofmalignanttumors

3、.Thestudyistodeterminetheexpressionofheparanasegeneandproteininrenalcellcarcinomaandtherelationshipwithitsdevelopment,progressionandmetastasis.MethodsFluorescencequantitativeRTPCRwasusedtodetecttheexpressionofheparanasemRNAin30casesoffreshrenalcellcarcinomaandadjacentnormaltissues.Im

4、munohistochemicaltechniquewasusedtodetecttheexpressionofheparanaseproteinin62casesofparaffinembeddedrenalcellcarcinomatissues.ResultsThepositiveexpressionsofheparanasemRNAandproteinwere36.7%(11/30)and24.2%(15/62),respectively.TheheperanasemRNAandproteinexpressionwerecorrelatedwiththe

5、pathologicaltype,clinicalstageandlymphnodemetastasis(P<0.05).ConclusionHeparanasegeneandproteinoverexpressionmightserveasamarkerfortheprognosisofrenalcellcarcinoma.KEYWORDS:kidneyneoplasms;heparanase;immunohistochemicaltechnique;fluorescencequantitativePCR细胞外基质和基底膜是肿瘤细胞侵袭及转移的屏障。糖氨聚

6、糖是屏障的主要成分之一，主要成分为硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateproteoglycan,HSPG)。乙酰肝素酶(heparanase,4Hpa)正是一种裂解糖氨聚糖中HS链的内切糖苷酶，在细胞侵袭中起着极其重要的作用。最近,随着Hpa基因得以克隆，Hpa在侵袭性细胞穿越血管壁，实现浸润、扩散、转移过程中的关键作用受到广泛关注[1]。我们应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平，探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白

7、的表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系。1资料与方法1.1临床资料收集中山大学第一附属医院泌尿外科2001年11月-2003年12月手术切除肾癌石蜡包埋组织标本62例，男性45例，女性17例。年龄31-78岁，平均54.1岁。Fuhrman分级：G118例，G230例，G314例。UICC临床分期：T126例，T220例，T316例。淋巴结转移阳性23例，阴性39例。10例正常肾脏组织为对照。另收集2002年1月-2003年12月手术切除新鲜肾癌标本和癌旁正常组织30例，男性21例，女性9例。年龄42-67岁，平均54.7岁。Fuhrman分级：G19例，G2

8、14例，G