肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究

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1、肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究作者：涂响安，丘少鹏，邓春华，吕自力，胡斌，郑克立【摘要】目的实验证明乙酰肝素酶在多种恶性肿瘤中有高表达，并可能在恶性肿瘤细胞侵袭及转移中发挥重要作用。本研究探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平。结果乙酰肝素酶mRNA在肾癌中阳性表达11例(%)，乙酰肝素酶蛋白在

2、肾癌中阳性表达15例(%)，其表达率与肿瘤的病理分级、临床分期和淋巴结转移有相关性(P【关键词】肾肿瘤；乙酰肝素酶；免疫组化；荧光定量PCRStudyofheparanasegeneandprotEinexpressioninrenalcellcarcinomaABSTRACT:ObjectiveHeparanaseisoverexpressedinmanymalignanttumorcells,itmayplayapivotalroleininvasionandmetastasisofmalignanttum

3、ors.ThestudyistodeterminetheexpressionofheparanasegeneandprotEIninrenalcellcarcinomaandtherelationshipwithitsdevelopment,progressionandmetastasis.MethodsFluorescencequantitativeRTPCRwasusedtodetecttheexpressionofheparanasemRNAin0casesoffreshrenalcellcarcino

4、maandadjacentnormaltissues.Immunohistochemicaltechniquewasusedtodetecttheexpressionofheparanaseproteinincasesofparaffinembeddedrenalcellcarcinomatissues.ResultsThepositiveexpressionsofheparanasemRNAandprotein%(11/30)%(15/62),respectively.TheheperanasemRNAan

5、dproteinexpressionwerecorrelatedwiththepathologicaltype,clinicalstageandlymphnodemetastasis(PKEYWORDS:kidneyneoplasms;heparanase;immunohistochemicaltechnique;fluorescencequantitativePCR细胞外基质和基底膜是肿瘤细胞侵袭及转移的屏障。糖氨聚糖是屏障的主要成分之一，主要成分为硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparansulfateprote

6、oglycan,HSPG)。乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)正是一种裂解糖氨聚糖中HS链的内切糖苷酶，在细胞侵袭中起着极其重要的作用。最近,随着Hpa基因得以克隆，Hpa在侵袭性细胞穿越血管壁，实现浸润、扩散、转移过程中的关键作用受到广泛关注[1]。我们应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平，探讨肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白的表达水平及其与肾癌发生、发展和转移的关系

7、。1资料与方法临床资料收集中山大学第一附属医院泌尿外科XX年11月-XX年12月手术切除肾癌石蜡包埋组织标本62例，男性45例，女性17例。年龄31-78岁，平均岁。Fuhrman分级：G118例，G20例，G14例。UICC临床分期：T16例，T20例，T16例。淋巴结转移阳性23例，阴性39例。10例正常肾脏组织为对照。另收集XX年1月-XX年12月手术切除新鲜肾癌标本和癌旁正常组织30例，男性21例，女性9例。年龄42-67岁，平均岁。Fuhrman分级：G1例，G14例，G3例。UICC临床分期：T11

8、2例，T10例，T8例。淋巴结转移阳性11例，阴性19例。荧光定量逆转录聚合酶链式反应肝素酶引物序列和探针heparaF：5′TCACCATTGACGCCAACCT3′；R：5′CTTTGGAGAACCCAGGAGGAT3′；Probe：5′FAMCCACGGACCCGCGGTTCCTAMRA3′(中山大学达安基因诊断中心合成)。组织RNA的提取组织块约100mg置匀浆