新型小分子af-hf001抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡研究

《新型小分子af-hf001抑制氧化应激诱导心肌细胞凋亡研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号密级硕士学位论文新型小分子AF-HF001抑制氧化应激诱导心肌题目：细胞凋亡研究英文并列题目：StudyonnovelsmallmoleculeAF-HF001ininhibitingtheoxidativestress-inducedcardiomyocyteapoptosis研究生：王古平专业：药学研究方向：药理学导师：冯柏年教授指导小组成员：颜桂军教授唐春雷讲师学位授予日期：2015年6月答辩委员会主席：江南大学地址：无锡市蠡湖大道1800号二○一五年四月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本

2、人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。、>签名：〜A日期：年々月7日i关于论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内

3、容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。签名：七、年导师签名：i~曰期：W年：月$曰摘要摘要心力衰竭是各类心血管疾病的终极归宿，集高发病率、高死亡率、可造成沉重经济负担的特点，对国民健康形成重要威胁。我们通过斑马鱼心力衰竭模型筛选，发现并证实新型小分子AF-HF001可改善心脏扩大率及血流动力学，体现出治疗心力衰竭的潜力。心室重塑是心力衰竭病程的基本机制，伴随着心肌细胞的肥大和缺失。心

4、肌缺血/缺氧引起氧化应激诱导的心肌细胞凋亡是心力衰竭的重要诱因。本研究利用双氧水和氯化钴诱导H9c2心肌细胞凋亡模型，采用Westernblot、ELISA和活性氧敏感的DCFH-DA荧光试剂检测等方法，研究AF-HF001对氧化应激诱导心肌细胞凋亡的保护机制及对氧化应激下心肌细胞中活性氧产生的影响；通过基因芯片筛选结合荧光定量PCR初步鉴定AF-HF001保护氧化应激诱导心肌细胞凋亡的候选分子。实验结果表明：AF-HF001能显著降低氧化应激诱导的细胞中caspase3的裂解以及DNA的断裂，且在终浓度

5、为50nM开始出现抑凋亡效果，浓度为500nM时可以完全逆转细胞凋亡；在50–500nM浓度范围内，随着AF-HF001添加浓度的增加，抗细胞凋亡效果越明显；同时DCFH-DA荧光检测结果显示AF-HF001能显著减少氧化应激下H9c2心肌细胞中活性氧的产生。基因芯片筛选结果显示，AF-HF001逆转双氧水刺激H9c2心肌细胞引起的相关基因表达变化：如Ndufs2，Ndufs3，TPM1，RyR1和TIMP4，涉及活性氧的生成、心肌收缩力和细胞外基质重塑等；如Araf，MAP2K5，Bax，Hsp27，A

6、paf1，casp3和casp7涉及MAPK和内源性线粒体信号通路。进一步研究表明AF-HF001促进H9c2心肌细胞凋亡初期JNK的磷酸化（p-T183/Y185），抑制凋亡晚期P38的活化（p-T180），调节抗细胞凋亡作用。基因芯片筛选研究与鉴定发现AF-HF001能有效减少双氧水诱导H9c2细胞中MDSP的表达，为了进一步确认在AF-HF001介导的抗细胞凋亡中MDSP的作用，通过荧光定量PCR实验发现，双氧水刺激H9c2心肌细胞会以时间依赖的方式促进MDSP的表达，且在刺激24h达到表达高峰；J

7、NK抑制剂（SP600125）明显增加双氧水诱导H9c2心肌细胞中MDSP的表达。pEGFP-MDSP质粒介导外源性过表达GFP-MDSP融合蛋白，可显著增加DNA的断裂；基因沉默H9c2大鼠心肌细胞中内源性MDSP表达后，可显著减少双氧水诱导的caspase3裂解的增加。因此，预处理AF-HF001激活JNK，显著逆转双氧水刺激MDSP表达量的增加，减少双氧水诱导的凋亡。综上所述：我们首次发现并证实新型小分子AF-HF001以浓度依赖的方式抑制H2O2诱导的H9c2心肌细胞的凋亡，并减少胞内活性氧的产生

8、；同时发现AF-HF001通过减少MDSP的表达，保护H2O2诱导的H9c2心肌细胞凋亡。因而，深入研究AF-HF001对氧化应激诱导心肌细胞凋亡的保护机制，为其发展成为临床药物奠定理论基础；同时，为心力衰竭的预防或治疗提供全新的靶点或方向。关键词：AF-HF001；心力衰竭；H9c2心肌细胞；细胞凋亡；活性氧；MDSPIAbstractAbstractHeartfailureisthefinaldestinationofav