MicroRNA-208a影响心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的实验研究

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1、分类号：R743.3单位代码：10159密级：公开学号：201352038硕士学位论文（同等学力人员申请硕士学位）中文题目：MicroRNA-208a影响心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的实验研究英文题目：TheexperimentalstudyofmicroRNA-208acorrelatesoxidativestressandapoptosisinducedbyH2O2incardiomyocytes论文作者：刘爱军指导教师：于波教授学科专业：内科学完成时间：2018年9月1中国医科大学硕士学位论文MicroRNA-208a影响心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的实验研究Theexperim

2、entalstudyofmicroRNA-208acorrelatesoxidativestressandapoptosisinducedbyH2O2incardiomyocytes论文作者刘爱军指导教师于波教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向冠心病论文起止时间2016年11月—2018年9月论文完成时间2018年9月中国医科大学（辽宁）2018年9月中国医科大学学位论文独创性声明工本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研宄作及取得的研宄成果，不包含其他人或，论文中除加以标注的内容外机构已经发表或撰写过的研宄成果，也

3、不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研宄提供贡献的其他个人和集体均己在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：／＞日期：＞沒年月ｒ日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留，、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件。和电子版，允许学位论文被查阅和借阅本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印。、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。（：请在括号，在保密保密（）

4、＿年后解密适用本授权书“”内划Ｖ）：论文作者签名：指导教师签名夕年工丨：丨日期：＞父年卜月ｒ日日期月ｆ日中国医科大学硕士学位论文摘要目的：近年来，在冠脉介入治疗及冠脉搭桥术、心脏外科体外循环等治疗中，许多组织器官缺血后重新得到血液再灌注。多数情况下，缺血后再灌注可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；但是有时在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象称为缺血再灌注损伤。缺血再灌注损伤的发生机制尚未彻底阐明。目前认为活性氧自由基的作用是缺血-再灌注损伤的重要发病学环节。在体外实验中，可以使用H2O2刺激大鼠乳鼠心肌细胞来

5、模拟活性氧损伤。MicroRNAs（miRNAs）是一类内源性的非编码RNA，它们能够通过与其靶基因mRNA的3’UTR区互补，在转录后水平上抑制它们靶基因的翻译。microRNA-208a（miR-208a）是一个在心肌中特异性表达的microRNA，种属间高度保守。因此推测，miR-208a具有如此高的心肌特异性，必定与心肌的特性有关。有文献报道，心肌梗死患者的血浆中，miR-208a的表达量明显增高。活性氧自由基生成增加产生的氧化应激以及由氧化应激触发的心肌细胞凋亡，是多种原因诱导的缺血-再灌注发生发展的共同基础。此外，在心肌缺血/再灌注损伤中，miR-208的表达量也有改变

6、。在心肌缺血/再灌注损伤中会产生大量的活性氧自由基，从而引起心肌细胞凋亡，加重心肌损伤。细胞凋亡是心肌缺血/再灌注损伤的病理特征之一，而且是损伤早期的主要死亡方式。因此，本课题主要探究miR-208a在心肌中保持如此高的表达量的原因，以及其生物学功能和潜在的分子生物学机制。方法：（1）首先，构建大鼠心脏缺血再灌注模型，再灌注损伤后取损伤处心脏组织以及损伤远端处心脏组织，使用组织研磨器将组织块研磨为细胞匀浆，再利用qRT-PCR的方法对miR-208a的表达进行检测。为了检查miR-208a在细胞对H2O2刺激的反应中的作用，用不同浓度的H2O2处理了心肌细胞。再利用qRT-PCR的

7、方法对miR-208a的表达进行检测。为了研究miR-208a是否参与ROS诱导的细胞凋亡，通过用化学合成的miR-208a模拟物（miR-208Mimic）转染心肌细胞以增强内源性miR-208a功能；或用化学合成的片段与miR-208a（miR-208aKD）的反向互补序列减弱内源性miR-208a效应，来建立过表达和敲低系统。（2）成功分离并培养新生大鼠心肌细胞用于机理研究。使用将外源性H2O2I中国医科大学硕士学位论文加入到培养的心肌细胞中，并在miR-208