wntβ-catenin通路介导mscs对损伤心肌细胞凋亡影响的实验研究

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1、？轴抑托尖赛硕±学位论文－ｅａｔｅｎＷｎｔ／Ｐｉｎ通路介导ＭＳＣｓ对损伤心肌细胞调ｔ影响的实验研究儿科学学科专业学位类型囚科学学位□专业学位研究生姓名化漓导师姓省、职称何学华主任医师论文编号湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月７２５．４密级分类号Ｒ学校代巧１０５４２学号２０口０。０１５０９－ｅａｔｅｎＷｎｔ／９ｉｎ通路介导ＭＳＣｓ对损伤心肌细胞调ｔ影响的实验硏究－ＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌＲｅｓｒａｒｃ

2、ｈａｂｏｕｔＷｎｔ／ｃａｔｅｎｉｎｐｐＳｉｎａｌｉｎＰａｔｈｗａＭｅｄｉａｔｅｓｔｈｅＥｆｆｅｃｔｓｏｆｇｇｙＭａｒｒｏｗＭｅｓｅｎｃｈｙｍａｌＳｔｅｍＣｅｌｌｓｏｎｔｈｅＡｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＩｎｊｕｒｅｄＣａｒｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ研究生姓名阮溜指导教师姓名、职称何学华主任医师学科专业儿科学研究方向小儿＇。血管湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一五年五月摘要【目的】通过提取培养也肌细胞及建立损伤也肌细胞模型，研究Ｗｎｔ／

3、－ｃａｔｅｎｉｎ信号通路是否参与也肌细胞调亡，并将骨髓间充质干细胞与Ｐ一ｔ／－损伤也肌细胞共培养，进步探讨Ｗｎ３ｃａｔｅｎｉｎ信号通路及也肌细（一胞调亡的变化，为损伤也肌细胞的骨髓间充质干细胞移植治疗提供定的实验结果。【方法】应用酶消化法及差速贴壁法获得乳鼠原代如肌细胞，用免疫组化－－法检测所获得细胞中有无ａ横纹肌肌动蛋白（ａｓｍｏｏ化ｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ，ａ－ＳＭＡ）。ｉ：Ｕ用Ｉｍ／Ｌ阿ＡｄｒｉａｍｃｎＡＤ民（鉴定必肌细胞霉素建立ｇ（ｙ，）损伤也肌细胞模型１，据不同的损伤

4、时间将也肌细胞分为Ａ、Ｂ、Ｃ、［］Ｄ四组，Ａ：ＡＤ民损伤也肌细胞１２ｈ，Ｂ：ＡＤ民损伤屯肌细胞２４ｈ，、Ｄ＇Ｃ：ＡＤ民屯肌细胞４８ｈ：正常。肌细胞组，应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ损伤，３－ｃａｔｅ５３法检测各组的Ｗｎｔ２、ｎｉｎ及蛋白的表达差异。（ｐ一进步分离、鉴定并培养骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓＢＭＳＣｓ，将也肌细胞分为■！￡组；Ｅ：正常屯，）：：肌细胞组，Ｆ损伤也肌细胞组，ＧＢＭＳＣｓ与损伤也肌细胞共培养ｔｔ组。应用

5、流式细胞仪检测各组也肌细胞调亡率，应用Ｗｅｓｅｒｎｂｌｏ法－ｃａｔｅｎ－ｍ５３检测ｉｎ、ｃｃ、蛋白的表达。ｐｙｐＩ【结果】ａ－１．对获得的乳鼠原代也肌细胞培养后进行横纹肌肌动蛋白检测，染色呈阳性，提示体外培养的细胞为也肌细胞。ｗｎｔ２－２？对Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ四组进行、目ｃａｔｅｎｉｎ及ｐ５３蛋白检测，结果显示ｔ２、Ｃ组的表达量分别为０．２４＋０．０４、，ｗｎ蛋白在Ａ、Ｂ＋＋－１．１日０．０５、０．３５０．０５，０ｃａｔｅｎｉｎ蛋白在Ａ、Ｂ、Ｃ组的表达量分＋．牛．别为０．

6、２１０．０４、０．３４＋０．０４、０７１００４，ｐ５３蛋白在Ａ、Ｂ、Ｃ组的牛０－０．巧＋００３０．．４００．８３＋０．０４ｔ２ｉ表达量分别为．、６１、，ｗｎ、目ｃａｔｅｎｎ及ｐ５３蛋白在Ａ、Ｂ、Ｃ组的表达量逐渐増加，差异均有统计学意义巧－－－＜０．０１）。Ｗｎｔ２、目ｃａｔｅｎｉｎ和ｐ５３在Ｄ组中无表达，Ｗｎｔ２和Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ相关系数为０．３１４、ｗｎｔ２和５３相关系数为０．５８４ｐ，其中５３与目－ｃａｔｅｎ＝ｐｉｎ的表达呈显著正相关（ｒ０．９４

7、０），差异均有统计＜化０－学意义巧１。Ｗｎｔｃａｔｅｎｉｎ信）推测／目号通路参与也肌细胞的损伤过程。３．Ｅ组也肌细胞调亡率为（０．７４＋０．６５）％，Ｆ组为（２６．５８＋３．８９）％，Ｇ组为（７．７２＋０．９０）％，经两两比较发现，Ｆ组的调亡率高于Ｅ、Ｇ组，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。４－－ｍ．Ｅｃａｔｅｎｉｎ、Ｃｙｃ及ｐ５３Ｈ种蛋白表达不能测出Ｆ组Ｐ，组－ｃａｔｅｎ－的Ｐｉｎｃｍｙｃ５３蛋白表达水平均Ｇ组，两组间差异，，ｐ高于－－有统计学意义（Ｐ

8、〈〇．０１）。Ｐｃａｔｅｎｉｎ与ｃｍｙｃ的相关系数为０．９４２、目－ｃａｔｅｎ－ｍｉｎ和ｐ５３的相关系数为０．８５２，Ｃｙｃ与ｐ５３相关系数为化９２７，Ｈ者之间呈显著正相关关系，差异均有统升学意义（Ｐ＜０．０１）。ｎ推测ＢＭＳＣｓ可抑制损伤也肌细胞的调亡蛋白ｐ５３的表达，可能与目－－ｍｃａｔｅｎｉｎ及其下游蛋白Ｃｙｃ表达下降