鸡朊蛋白对df-1细胞活性及凋亡通路wntβ-catenin的影响

《鸡朊蛋白对df-1细胞活性及凋亡通路wntβ-catenin的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号S852.65+9.7密级非密UDC单位编号10733甘肃农业大学硕士学位论文鸡朊蛋白对DF-1细胞活性及凋亡通路Wnt/β-catenin的影响ImpactofchickenprionproteinontheviabilityofDF-1cellandtheapoptosispathwayWnt/β-catenin杨润霞指导教师姓名吴润教授（甘肃农业大学兰州730070）学科专业名称预防兽医学研究方向兽医微生物学与免疫学论文答辩日期2015年6月2日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席柳纪省研究员评阅人刘光远研究员曾巧英教授20

2、15年6月ClassificationNo.：S852.65+9.7Secrecylevel：ZeroUDC：Schoolcode：10733GansuAgriculturalUniversityADissertationfortheMaster’sDegreeImpactofChickenprionproteinontheviabilityofDF-1cellandtheapoptosis-relatedpathwayWnt/β-cateninPostgraduate:Yang-Run-XiaAdvisor:Prof.WuRunSpeci

3、ality:PreventiveVeterinaryScienceResearchField:VeterinaryMicrobiologyandImmunologySubmittedTime:June,2015Address:Lanzhou,China,730070甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要摘要【目的】利用已建立的鸡朊蛋白过表达和抑制表达DF-1细胞系，通过与正常DF-1细胞系在细胞粘附、侵袭、增殖和凋亡方面的比较，探究鸡朊蛋白对DF-1细胞的影响；检测朊蛋白过表达和抑制表达DF-1细胞与正常DF-1细胞抗凋亡相关基因CK2和B

4、cl-2的RNA表达量变化，采用CK2抑制剂盐酸米托蒽醌阻断凋亡相关信号转导途径Wnt/β-catenin来阐明朊蛋白过表达以及抑制表达影响DF-1细胞的分子机制，为进一步了解鸡朊蛋白的生理功能和禽源细胞肿瘤发生机制研究提供理论依据。【方法】（1）根据GenBank中鸡CK2、Bcl-2和β-actin基因序列各设计一对引物，经过反应条件优化，建立ChCK2和ChBcl-2mRNA的反转录荧光定量PCR检测方法；将传代稳定后收集的DF-1-PrP、DF-1和DPs3-5细胞提取其总RNA，以荧光定量RT-PCR法检测3种细胞的CK2和Bcl

5、-2mRNA表达量差异。（2）在DF-1-PrP、DF-1和DPs3-5细胞中加入不同浓度盐酸米托蒽醌作用后，以细胞MTT法（噻唑蓝）、流式细胞术、粘附试验和侵袭试验等方法检测朊蛋白与CK2对3种细胞增殖、粘附、侵袭和凋亡的影响，并利用PRNPSYBRGreenⅠ双标准曲线荧光定量PCR法检测这3种细胞在不同盐酸米托蒽醌浓度下PRNPmRNA表达量变化。【结果】（1）建立了鸡CK2、Bcl-2基因和内参基因β-actin的荧光定量RT-PCR检测法及其最佳反应体系和条件，以及3种基因的标准曲线方程式分别为y=－3.219x＋46.2、y=－

6、3.17x＋45.52和y=－3.244＋43.62，其灵敏度为10。ChCK2RT-PCR标准曲线熔解峰单一，具有良好的线性关系。测得DF-1-PrP53和DPs3-5细胞系的CK2基因相对表达量分别为6.46×10和8.32×10，Bcl-2基因相对表达量分别为537.91×10和1.51×10，CK2和Bcl-2基因在DF-1-PrP细胞中表达量都显著高于DF-1细胞（p<0.05），表明在DF-1细胞中CK2和Bcl-2均与朊蛋白的表达量正相关；（2）细胞粘附、增殖和侵袭试验显示，各实验组的细胞粘附、增殖和侵袭活性均低于空白对照组细

7、胞的活性。当盐酸米托蒽醌终浓度低于25nmol/L时，对细胞的粘附、增殖和侵袭抑制影响较小；当其终浓度升高至50nmol/L时，对细胞的粘附、增殖和侵袭活性的抑制作用明显增强（P<0.05），并随盐酸米托蒽醌浓度增加而抑制作用逐渐增强，表现出量效关系。细胞凋亡试验显示，朊蛋白过表达细胞DF-1-PrP的凋亡率低于正常DF-1和朊蛋白抑C制表达DPs3-5，随着米托蒽醌浓度的增大细胞凋亡率逐步增加，同时由于PrP过表达，在盐酸米托蒽醌浓度低于50nmol/L时，DF-1-PrP细胞表现出一定的抵抗作用，获得抵抗米托蒽醌作用的抑制能力；在米托蒽

8、醌作用下，3种细胞PRNP基因mRNA拷贝数均呈现变化，随着盐酸米托蒽醌浓度提高大致呈现下降趋势。C【结论】（1）CK2、Bcl-2基因表达量与PRNP基因表达量密切相关，提示C