wntβ-catenin信号通路对人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：406521212489南昌大学硕士研究生学位论文Wnt/β-catenin信号通路对人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响RolesofWnt/β-cateninsignalinginneuraldifferentiationofhumanbonemarrowmesenchymalstemcells施剑明培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：殷明教授主任医师殷嫦嫦教授申请学位的学科门类：医学学科专业名称：外科学（骨外）论文答辩日期：2015年5月答辩委员会主席：马勇评阅人：张斌熊龙2015年5月学位

2、论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：施剑明签字日期：2015年6月7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授

3、权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：施剑明导师签名（手写）：殷明签字日期：2015年6月7日签字日期：2015年6月9日论文题目Wnt/β-catenin信号通路对人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响姓名施剑明学号40

4、6521212489论文级别博士□硕士√院/系/所医学院专业外科学（骨外）E_mail备注：√公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，bFGF）、表皮生长因子（epidermalgrowthfactor，EGF）单独及联合对人骨髓间充质干细胞（humanbonemarrowmesenchymalstemcells，hBMSCs）向神经细胞分化的影响，并进一步研究Wnt/β-catenin信号通路在hBMSCs向神经细胞分化中的作用。方法

5、：（1）将购自江阴齐氏生物科技有限公司第2代hBMSCs进行传代、纯化，取第4代hBMSCs进行流式细胞仪检测细胞表面骨髓基质标志CD44、CD90和造血细胞标志CD19、CD34。（2）取第4-6代干性维持较好的hBMSCs，以含1%FBS的α-MEM为基础诱导培养基，根据诱导条件不同分为5组：空白对照组（不添加任何物质）、EGF组(添加20ng/mLEGF)、bFGF组(添加20ng/mLbFGF)、EGF+bFGF组(添加20ng/mLEGF及20ng/mLbFGF)、EGF+bFGF+DKK-1组（添加20ng/mLEGF、20ng/mLbF

6、GF及100ng/mLDKK-1），倒置相差显微镜观察细胞形态变化。（3）连续诱导7d后，采用RT-PCR检测神经干细胞标志nestin，神经元细胞标志NSE、MAP-2，神经胶质细胞标志GFAPmRNA表达水平，Westernblot及免疫荧光检测NSE、GFAP蛋白表达水平。（4）连续诱导7d后，采用RT-PCR检测Wnt/β-catenin信号通路关键组件GSK-3β、β-catenin、cyclinD1mRNA表达水平，Westernblot检测总β-catenin、P-β-catenin、Cytoplasm-β-catenin、Nucleu

7、s-β-catenin蛋白表达水平，免疫荧光检测β-catenin蛋白亚细胞分布情况。结果：（1）第4代hBMSCs基本呈单一成纤维细胞样，漩涡状、鱼群样贴壁生长，流式鉴定结果示CD44、CD90表达分别为98.24%、95.89%，而CD19、CD34合计表达仅为1.91%。（2）连续诱导7d后，bFGF组、EGF+bFGF组及EGF+bFGF+DKK-1组细胞胞体变小，形成双极和复杂多极的细胞体，部分细胞向四周伸出突起，且少II摘要数细胞相邻突起间存在网络样连接，呈典型的神经样细胞形态，而空白对照组与EGF组细胞形态无明显改变。（3）神经细胞标志

8、检测结果：RT-PCR检测示：与空白对照组比较，bFGF组nestin、NSE、MAP-2表达升高（P<0.